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摘要 [目的]研究野火球煎剂的镇静催眠作用。[方法]试验分为空白对照（等容生理盐水）、地西泮（0.001 g/kg）与野火球煎剂高、中、低剂量（3.12、1.56、0.78 g/kg）组，通过小鼠自主活动试验观察其对小鼠活动的影响，通过阈上和阈下剂量戊巴比妥钠的睡眠试验观察其对小鼠入睡潜伏期和睡眠时间的协同影响和尼可刹米对小鼠的惊厥作用。[结果]与空白对照组比较，野火球煎剂高、中、低剂量组小鼠自主活动次数显著减少，可显著缩短小鼠睡眠潜伏期、延长小鼠睡眠时间，且野火球煎剂有抗尼可刹米致惊厥发作的作用。[结论]野火球煎剂具有镇静催眠作用和抗惊厥作用，为进一步研究野火球镇静催眠作用机制奠定基础。
关键词 野火球煎剂；镇静；催眠；抗惊厥
中图分类号 S567.23+9 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2016）03-149-02
Abstract [Objective]To research the sedative and hypnotic effects of Trifolium lupinaster decoction. [Method]Mice were randomly divided into five groups， which were blank control （normal saline）， diazepam group （0.001 g/kg）， high， middle and lowdosage groups （3.12， 1.56， 0.78 g/kg） of T. lupinaster decoction. Mice activity was studied by spontaneous activity experiment. Sleep test of pentobarbital sodium at suprali minal and subliminal doses was carried out to observe the convulsion effects of nikethamideon mice， as well as the collaborative effects on sleep latency and sleeping time of mice. [Result]Compared with blank control group， autonomic activity times of mice reduced significantly at high， middle and lowdosage groups of T. lupinaster. Thus， the sleep latency of mice decreased significantly； and the sleeping time of mice prolonged. T. lupinaster decoction had the antiseizures effects induced by nikethamide. [Conclusion]T. lupinaster decoction has both anticonvulsant effects and sedative hypnotic effects， which lays foundation for the further research on sedative hypnotic effects of T. lupinaster.
Key words T. lupinaster decoction； Sedation； Hypnosis； Anticonvulsion
野火球（Trifolium lupinaster L.）別名野车轴草，是豆科车轴草属多年生草本植物，广泛分布于黑龙江、吉林、辽宁、内蒙古、河北、山西等地，始载于《中国主要植物图说》，具有镇静安神、止咳、止血等功效。野火球是一种优良牧草，由于花期较长、花色鲜艳，还可以作为观赏植物和蜜源植物[1]。国外对野火球的研究很少，国内有对其化学成分[2]、营养价值[3]、组织培养[4-5]等方面的研究，但镇静催眠方面的研究目前尚未见报道。笔者通过小鼠自主活动试验观察其对小鼠活动的影响，通过阈上和阈下剂量戊巴比妥钠的睡眠试验观察其对小鼠入睡潜伏期和睡眠时间的协同影响作用[6]，以期为野火球的进一步开发利用提供理论依据和科学数据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 仪器。YLS1A多功能小鼠自主活动记录仪（济南益延科技发展有限公司）；1 mL 一次性注射器（上海治宇医疗器械有限公司）。
1.1.2 药品。野火球煎剂（佳木斯大学药学院制备）；地西泮注射液（天津药业集团有限公司，批号1408271）；戊巴比妥钠（德国merk公司，批号20140820）；尼可刹米注射液（天津药业集团新郑股份有限公司，批号1407091）。
1.1.3 动物。清洁级昆明种雄性小鼠180只，体重18～22 g，由哈尔滨医科大学实验动物中心提供[动物使用许可证号为SCXK（黑）2013001]。饲养温度为（23±1）℃，12 h 人工循环光照（光照期为08：00～20：00），自由摄食饮水。试验前，于饲养环境中适应7 d。
1.2 方法
1.2.1 野火球煎剂的制备方法。
常规方法煎煮，称取野火球药材200 g，加10倍于药材的温水，浸泡30 min后微火煎煮15 min，文火煎20 min，滤出药渣，将药液浓缩成100 mL，制得含生药量为2 g/mL 野火球水煎液。
1.2.2 野火球煎剂对小鼠自主活动的影响。试验分为5 组，即空白对照（等容生理盐水）、地西泮（0.001 g/kg）与野火球煎剂高、中、低剂量（3.12、1.56、0.78 g/kg，分别为临床成人用量的2、1、0.5 倍）。灌胃给药，每天1 次，连续10 d，末次给药60 min后，测定小鼠5 min内自主活动次数[7]。 1.2.3 野火球煎剂对阈下剂量戊巴比妥钠镇静、催眠作用的影响。
分组与给药同“1.2.2”方法。各组均于末次给药60 min后，按照小鼠体重腹腔注射阈下剂量戊巴比妥钠（45 mg/kg），记录60 min 内的入睡只数、睡眠潜伏期和睡眠时间。从腹腔注射戊巴比妥钠到翻正反射消失为睡眠潜伏期。以翻正反射消失1 min 以上者为入睡，以翻正反射消失到翻正反射恢复为睡眠时间。未入睡者睡眠潜伏期定为60 min。
1.2.4 野火球煎剂对阈上剂量戊巴比妥钠镇静、催眠作用的影响。
分组与给药同“1.2.2”方法。各组均于末次给药60 min后，按照小鼠体重腹腔注射阈上剂量的戊巴比妥钠（60 mg/kg），按“1.2.3”方法记录睡眠潜伏期和睡眠时间。
1.2.5 抗尼可刹米致小鼠惊厥作用。分组与给药同“1.2.2”方法。各组均于末次给药60 min后，按照小鼠体重腹腔注射尼可刹米（0.018 g/kg），记录惊厥小鼠数（以小鼠出现跌倒并呈现阵挛性惊厥为指标）[8]。
2 结果与分析
2.1 野火球煎剂对小鼠自主活动的影响
由表1可见，与空白对照组比较，野火球煎剂高、中、低剂量组小鼠5 min 内自主活动次数显著减少（P<0.01）。
2.2 野火球煎剂对阈下剂量戊巴比妥钠镇静、催眠作用的影响
表2显示，与空白对照组比较，野火球煎剂高、中、低剂量组小鼠入睡只数显著增加，睡眠潜伏期显著缩短，睡眠时间显著延长（P<0.01）。
2.3 野火球煎劑对阈上剂量戊巴比妥钠镇静、催眠作用的影响
从表3可看出，与空白对照组比较，野火球煎剂高、中、低剂量组小鼠睡眠潜伏期缩短，睡眠时间显著延长（P<0.01）。
2.4 抗惊厥作用 由表4可见，与空白组比较，地西泮组及野火球高、低剂量组可显著降低小鼠的惊厥发生率，野火球中剂量组能降低小鼠的惊厥发生率但无明显差异。表明野火球有一定的抗惊厥作用。
3 小结
该试验分别采用小鼠自主活动试验及阈上、阈下剂量戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠试验及尼可刹米致小鼠惊厥试验来 评价野火球煎剂对小鼠的镇静催眠效果。结果表明，与空白对照组比较，野火球煎剂高、中、低剂量组可以明显减少小鼠5 min内自主活动次数；戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠试验中，野火球煎剂高、中、低剂量组可显著缩短小鼠睡眠潜伏期、延长小鼠睡眠时间；尼可刹米致小鼠惊厥试验验证了野火球煎剂能够降低小鼠的惊厥发生率。由此可知，野火球煎剂具有一定的镇静催眠作用。
参考文献
[1]王跃东.三叶草[M].昆明：云南科技出版社，2000：94-98.
[2]王丽艳，邢凤兰，高春林，等.野火球的化学成分研究[J].中草药，2010，11（41）：1776-1779.
[3]崔日顺，罗忠默，张万哲，等.野火球草粉开发利用及调制技术[J].中国饲料，1995（17）：25-27.
[4]赵桂兰，罗希明，刘颜芝.野火球悬浮培养细胞原生质体再生植株[J].植物学报，1991，33（7）： 547-551.
[5]罗希明，谢雪菊，陈忠亮.沙打旺、红豆草和野火球外植体一次培养再生植株[J].中国草地，1991（6）：79，471.
[6]刘瑾，李岩，王爱洁，等.桑椹补脑膏对小鼠镇静催眠作用实验研究[J].辽宁中医药大学学报，2015，17（3）：17-19.
[7]赵江丽，赵婷，张敏.半夏不同溶剂提取物镇静催眠活性比较[J].安徽农业科学，2011，30（35）：21627-21628.
[8]黎同明，高洁，王桂香.乌梅水煎液镇静催眠及抗惊厥作用实验研究[J].中医学报，2011，26（7）：818-820.
关键词 野火球煎剂；镇静；催眠；抗惊厥
中图分类号 S567.23+9 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2016）03-149-02
Abstract [Objective]To research the sedative and hypnotic effects of Trifolium lupinaster decoction. [Method]Mice were randomly divided into five groups， which were blank control （normal saline）， diazepam group （0.001 g/kg）， high， middle and lowdosage groups （3.12， 1.56， 0.78 g/kg） of T. lupinaster decoction. Mice activity was studied by spontaneous activity experiment. Sleep test of pentobarbital sodium at suprali minal and subliminal doses was carried out to observe the convulsion effects of nikethamideon mice， as well as the collaborative effects on sleep latency and sleeping time of mice. [Result]Compared with blank control group， autonomic activity times of mice reduced significantly at high， middle and lowdosage groups of T. lupinaster. Thus， the sleep latency of mice decreased significantly； and the sleeping time of mice prolonged. T. lupinaster decoction had the antiseizures effects induced by nikethamide. [Conclusion]T. lupinaster decoction has both anticonvulsant effects and sedative hypnotic effects， which lays foundation for the further research on sedative hypnotic effects of T. lupinaster.
Key words T. lupinaster decoction； Sedation； Hypnosis； Anticonvulsion
野火球（Trifolium lupinaster L.）別名野车轴草，是豆科车轴草属多年生草本植物，广泛分布于黑龙江、吉林、辽宁、内蒙古、河北、山西等地，始载于《中国主要植物图说》，具有镇静安神、止咳、止血等功效。野火球是一种优良牧草，由于花期较长、花色鲜艳，还可以作为观赏植物和蜜源植物[1]。国外对野火球的研究很少，国内有对其化学成分[2]、营养价值[3]、组织培养[4-5]等方面的研究，但镇静催眠方面的研究目前尚未见报道。笔者通过小鼠自主活动试验观察其对小鼠活动的影响，通过阈上和阈下剂量戊巴比妥钠的睡眠试验观察其对小鼠入睡潜伏期和睡眠时间的协同影响作用[6]，以期为野火球的进一步开发利用提供理论依据和科学数据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 仪器。YLS1A多功能小鼠自主活动记录仪（济南益延科技发展有限公司）；1 mL 一次性注射器（上海治宇医疗器械有限公司）。
1.1.2 药品。野火球煎剂（佳木斯大学药学院制备）；地西泮注射液（天津药业集团有限公司，批号1408271）；戊巴比妥钠（德国merk公司，批号20140820）；尼可刹米注射液（天津药业集团新郑股份有限公司，批号1407091）。
1.1.3 动物。清洁级昆明种雄性小鼠180只，体重18～22 g，由哈尔滨医科大学实验动物中心提供[动物使用许可证号为SCXK（黑）2013001]。饲养温度为（23±1）℃，12 h 人工循环光照（光照期为08：00～20：00），自由摄食饮水。试验前，于饲养环境中适应7 d。
1.2 方法
1.2.1 野火球煎剂的制备方法。
常规方法煎煮，称取野火球药材200 g，加10倍于药材的温水，浸泡30 min后微火煎煮15 min，文火煎20 min，滤出药渣，将药液浓缩成100 mL，制得含生药量为2 g/mL 野火球水煎液。
1.2.2 野火球煎剂对小鼠自主活动的影响。试验分为5 组，即空白对照（等容生理盐水）、地西泮（0.001 g/kg）与野火球煎剂高、中、低剂量（3.12、1.56、0.78 g/kg，分别为临床成人用量的2、1、0.5 倍）。灌胃给药，每天1 次，连续10 d，末次给药60 min后，测定小鼠5 min内自主活动次数[7]。 1.2.3 野火球煎剂对阈下剂量戊巴比妥钠镇静、催眠作用的影响。
分组与给药同“1.2.2”方法。各组均于末次给药60 min后，按照小鼠体重腹腔注射阈下剂量戊巴比妥钠（45 mg/kg），记录60 min 内的入睡只数、睡眠潜伏期和睡眠时间。从腹腔注射戊巴比妥钠到翻正反射消失为睡眠潜伏期。以翻正反射消失1 min 以上者为入睡，以翻正反射消失到翻正反射恢复为睡眠时间。未入睡者睡眠潜伏期定为60 min。
1.2.4 野火球煎剂对阈上剂量戊巴比妥钠镇静、催眠作用的影响。
分组与给药同“1.2.2”方法。各组均于末次给药60 min后，按照小鼠体重腹腔注射阈上剂量的戊巴比妥钠（60 mg/kg），按“1.2.3”方法记录睡眠潜伏期和睡眠时间。
1.2.5 抗尼可刹米致小鼠惊厥作用。分组与给药同“1.2.2”方法。各组均于末次给药60 min后，按照小鼠体重腹腔注射尼可刹米（0.018 g/kg），记录惊厥小鼠数（以小鼠出现跌倒并呈现阵挛性惊厥为指标）[8]。
2 结果与分析
2.1 野火球煎剂对小鼠自主活动的影响
由表1可见，与空白对照组比较，野火球煎剂高、中、低剂量组小鼠5 min 内自主活动次数显著减少（P<0.01）。
2.2 野火球煎剂对阈下剂量戊巴比妥钠镇静、催眠作用的影响
表2显示，与空白对照组比较，野火球煎剂高、中、低剂量组小鼠入睡只数显著增加，睡眠潜伏期显著缩短，睡眠时间显著延长（P<0.01）。
2.3 野火球煎劑对阈上剂量戊巴比妥钠镇静、催眠作用的影响
从表3可看出，与空白对照组比较，野火球煎剂高、中、低剂量组小鼠睡眠潜伏期缩短，睡眠时间显著延长（P<0.01）。
2.4 抗惊厥作用 由表4可见，与空白组比较，地西泮组及野火球高、低剂量组可显著降低小鼠的惊厥发生率，野火球中剂量组能降低小鼠的惊厥发生率但无明显差异。表明野火球有一定的抗惊厥作用。
3 小结
该试验分别采用小鼠自主活动试验及阈上、阈下剂量戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠试验及尼可刹米致小鼠惊厥试验来 评价野火球煎剂对小鼠的镇静催眠效果。结果表明，与空白对照组比较，野火球煎剂高、中、低剂量组可以明显减少小鼠5 min内自主活动次数；戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠试验中，野火球煎剂高、中、低剂量组可显著缩短小鼠睡眠潜伏期、延长小鼠睡眠时间；尼可刹米致小鼠惊厥试验验证了野火球煎剂能够降低小鼠的惊厥发生率。由此可知，野火球煎剂具有一定的镇静催眠作用。
参考文献
[1]王跃东.三叶草[M].昆明：云南科技出版社，2000：94-98.
[2]王丽艳，邢凤兰，高春林，等.野火球的化学成分研究[J].中草药，2010，11（41）：1776-1779.
[3]崔日顺，罗忠默，张万哲，等.野火球草粉开发利用及调制技术[J].中国饲料，1995（17）：25-27.
[4]赵桂兰，罗希明，刘颜芝.野火球悬浮培养细胞原生质体再生植株[J].植物学报，1991，33（7）： 547-551.
[5]罗希明，谢雪菊，陈忠亮.沙打旺、红豆草和野火球外植体一次培养再生植株[J].中国草地，1991（6）：79，471.
[6]刘瑾，李岩，王爱洁，等.桑椹补脑膏对小鼠镇静催眠作用实验研究[J].辽宁中医药大学学报，2015，17（3）：17-19.
[7]赵江丽，赵婷，张敏.半夏不同溶剂提取物镇静催眠活性比较[J].安徽农业科学，2011，30（35）：21627-21628.
[8]黎同明，高洁，王桂香.乌梅水煎液镇静催眠及抗惊厥作用实验研究[J].中医学报，2011，26（7）：818-820.