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摘 要：本文采用高校液相测定了琥乙红霉素片中红霉素的含量，固定相为：安捷伦Cl8（4.6 mm×250 mm，5um），以0.01mol/L磷酸二氢铵溶液（三乙胺调节pH6.0）-乙腈为流动相，梯度洗脱，检测波长为205nm，流速1.0mL·min-1，柱温：30℃。红霉素在50～600μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。红霉素的平均回收率为99.5%，RSD为0.86%（n=6）；此方法简便、准确、重现性好，可用于琥乙红霉素片中红霉素的含量测定。
关键词：琥乙红霉素片；红霉素；含量
琥乙红霉素属大环内酯类抗生素，为红霉素的琥珀酸乙酯，对军团菌属，胎儿弯曲菌，某些螺旋体，立克次体属和衣原体属和衣原体也有抑制作用。琥乙红霉素可作为青霉素过敏患者治疗下列感染的替代用药：溶血性链球菌所致猩红热、蜂窝织炎；厌氧菌所致的口腔感染；衣原体属、支原体属所致泌尿生殖系感染；沙眼衣原体结膜炎；放线菌病；梅毒；白喉及白喉带菌者；气性坏疽、炭疽、破伤风；李斯特菌病等。高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography ＼ HPLC）又称“高压液相色谱”，可分为“高压输液泵”、“色谱柱”、“进样器”、“检测器”、“馏分收集器”以及“数据获取与处理系统”等部分。本文采用高校液相测定了琥乙红霉素片中红霉素的含量。
1仪器与试药
HWP-5实验室蒸馏水器（郑州泽铭科技有限公司）；上海 721G可见光分光光度计（上海圣科仪器设备有限公司）；上海雷磁 WZS-180A型台式浊度计（上海圣科仪器设备有限公司）；上海越平FA1004B电子天平（上海圣科仪器设备有限公司）；Sail（赛尔）1000液相色谱仪（月旭科技（上海）股份有限公司）；Histoon Lab I-05实验室超纯水机（科尔顿（中国）有限公司）；10升数控型超声波清洗器（天津市瑞普电子仪器公司）。红霉素对照品由中国药品生物制品检定所提供。冰醋酸（苏州市万隆化学试剂有限公司）、磷酸氢二钠（苏州市万隆化学试剂有限公司）、乙腈（德国默克MERCK原装进口）、磷酸（武汉强松精细化学品有限公司）、甲醇（德国默克MERCK原装进口）、三乙胺（武汉强松精细化学品有限公司）。
2含量测定
2.1色谱条件：依据查阅文献及考查的结果 ，确定色谱条件如下[1-6]。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6 mm×250 mm，5um）；以0.01mol/L磷酸二氢铵溶液（三乙胺调节pH6.0）-乙腈为流动相，梯度洗脱，梯度，0-10min，乙腈由10%上升到30%，10-15 min乙腈由30%上升到40%，15-20min，乙腈100%） ；检测波长为205nm。理论板数按红霉素峰计算应不得低于2000。
2.2供试品溶液的制备
取琥乙红霉素片，研细，精密称取，加5毫升磷酸盐缓冲液（pH6.5）超声处理10分钟，放冷，滤过，滤液置10毫升量瓶中，加磷酸盐缓冲液（pH6.5）至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.3对照品溶液的制备
精密称取红霉素对照品约5mg，用磷酸盐缓冲液（pH6.5）溶解并稀释成每1ml中含200μg的溶液，作为对照溶液。
2.4阴性溶液的制备
按样品制备工艺制成阴性对照样品，依上述方法测定，结果在红霉素出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5准曲线的制备
制备浓度为50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、600μg·mL-1的对照品溶液，测定峰面积。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，浓度为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，红霉素对照品在50～600μg·mL-1范围内线性关系良好。
2.6精密度试验
精密吸取红霉素对照品溶液10μL重复进样6次，对照品峰面积积分值的RSD为0.86%。结果表明，本实验精密度良好。
2.7重现性试验
称取同一批的琥乙红霉素片样品6份，测定含量并计算RSD值，结果RSD为0.85%，结果表明此方法的重现性良好。
2.8稳定性试验
取供试品溶液，分别在0，2，4，8小时进样测定，供试品红霉素峰面积积分值的RSD为0.83%。结果表明红霉素至少在8小时内稳定。
2.9回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，分精密添加一定量的红霉素对照品，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.5%，RSD为0.86%。
2.10样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定琥乙红霉素片三批样品中红霉素的含量，含量为琥乙红霉素的4.1%、3.1%、3.6%。
3讨论
分别考察以乙腈-0.02mol·L-1乙酸铵溶液为流动相进行梯度洗脱；乙腈-水（23∶77）（用冰醋酸调pH至4.0）；乙腈-水（23∶77）（用冰醋酸调pH至5.0）；0.083mmol/L乙酸胺溶液（pH值5.4）-乙腈-甲醇（45∶35∶20）；水-甲醇-三乙胺（60∶40：0.01）；乙腈-0.08%磷酸溶液（20：80）；0.01mol/L磷酸二氢铵溶液（三乙胺调节pH6.0）-乙腈为流动相，梯度洗脱；0.05mol·L-1磷酸二氢钠溶液（用磷酸调节pH值至2.7）-乙腈（54∶46）；0.02 mol·L-1磷酸二氢钾（氢氧化钠调pH至6.5）-乙腈（5∶1）不同比例的流动相，结果以0.01mol/L磷酸二氢铵溶液（三乙胺调节pH6.0）-乙腈为流动相，梯度洗脱，供试品各峰分离效果最好。此方法可用于琥乙红霉素片中红霉素的含量测定。
参考文献：
[1]罗意文，姚苑梅，李成.高效液相色谱法测定红霉素眼膏的含量[J].中国实用医药.2006（06）
[2]李成，徐玉红，吴芳，陈连剑，陈钦镑，魏怡雯. HPLC测定复方红霉素洗剂中红霉素的含量[J]. 现代食品与药品杂志.2006（03）
[3]常一丁，劉艳红，栾国华.HPLC法测定红霉素肠溶片中红霉素的含量[J].当代医学（学术版）.2008（02）
[4]阚家义，屈建.HPLC法同时测定复方罗红霉素片中盐酸氨溴索与罗红霉素的含量[J].中国新药杂志.2009（02）
[5]邓水德.高效液相色谱法与微生物法测定罗红霉素软膏含量的比较[J].中国现代应用药学.2003（05）
[6]陈莹，陈辉，林谷园，林荆，江滨炜，吴文凡.超高效液相色谱串联质谱法对鳗鱼中大环内酯类、喹诺酮类和磺胺类兽药残留量的同时测定[J].分析测试学报.2008（05）
关键词：琥乙红霉素片；红霉素；含量
琥乙红霉素属大环内酯类抗生素，为红霉素的琥珀酸乙酯，对军团菌属，胎儿弯曲菌，某些螺旋体，立克次体属和衣原体属和衣原体也有抑制作用。琥乙红霉素可作为青霉素过敏患者治疗下列感染的替代用药：溶血性链球菌所致猩红热、蜂窝织炎；厌氧菌所致的口腔感染；衣原体属、支原体属所致泌尿生殖系感染；沙眼衣原体结膜炎；放线菌病；梅毒；白喉及白喉带菌者；气性坏疽、炭疽、破伤风；李斯特菌病等。高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography ＼ HPLC）又称“高压液相色谱”，可分为“高压输液泵”、“色谱柱”、“进样器”、“检测器”、“馏分收集器”以及“数据获取与处理系统”等部分。本文采用高校液相测定了琥乙红霉素片中红霉素的含量。
1仪器与试药
HWP-5实验室蒸馏水器（郑州泽铭科技有限公司）；上海 721G可见光分光光度计（上海圣科仪器设备有限公司）；上海雷磁 WZS-180A型台式浊度计（上海圣科仪器设备有限公司）；上海越平FA1004B电子天平（上海圣科仪器设备有限公司）；Sail（赛尔）1000液相色谱仪（月旭科技（上海）股份有限公司）；Histoon Lab I-05实验室超纯水机（科尔顿（中国）有限公司）；10升数控型超声波清洗器（天津市瑞普电子仪器公司）。红霉素对照品由中国药品生物制品检定所提供。冰醋酸（苏州市万隆化学试剂有限公司）、磷酸氢二钠（苏州市万隆化学试剂有限公司）、乙腈（德国默克MERCK原装进口）、磷酸（武汉强松精细化学品有限公司）、甲醇（德国默克MERCK原装进口）、三乙胺（武汉强松精细化学品有限公司）。
2含量测定
2.1色谱条件：依据查阅文献及考查的结果 ，确定色谱条件如下[1-6]。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6 mm×250 mm，5um）；以0.01mol/L磷酸二氢铵溶液（三乙胺调节pH6.0）-乙腈为流动相，梯度洗脱，梯度，0-10min，乙腈由10%上升到30%，10-15 min乙腈由30%上升到40%，15-20min，乙腈100%） ；检测波长为205nm。理论板数按红霉素峰计算应不得低于2000。
2.2供试品溶液的制备
取琥乙红霉素片，研细，精密称取，加5毫升磷酸盐缓冲液（pH6.5）超声处理10分钟，放冷，滤过，滤液置10毫升量瓶中，加磷酸盐缓冲液（pH6.5）至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.3对照品溶液的制备
精密称取红霉素对照品约5mg，用磷酸盐缓冲液（pH6.5）溶解并稀释成每1ml中含200μg的溶液，作为对照溶液。
2.4阴性溶液的制备
按样品制备工艺制成阴性对照样品，依上述方法测定，结果在红霉素出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5准曲线的制备
制备浓度为50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、600μg·mL-1的对照品溶液，测定峰面积。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，浓度为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，红霉素对照品在50～600μg·mL-1范围内线性关系良好。
2.6精密度试验
精密吸取红霉素对照品溶液10μL重复进样6次，对照品峰面积积分值的RSD为0.86%。结果表明，本实验精密度良好。
2.7重现性试验
称取同一批的琥乙红霉素片样品6份，测定含量并计算RSD值，结果RSD为0.85%，结果表明此方法的重现性良好。
2.8稳定性试验
取供试品溶液，分别在0，2，4，8小时进样测定，供试品红霉素峰面积积分值的RSD为0.83%。结果表明红霉素至少在8小时内稳定。
2.9回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，分精密添加一定量的红霉素对照品，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.5%，RSD为0.86%。
2.10样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定琥乙红霉素片三批样品中红霉素的含量，含量为琥乙红霉素的4.1%、3.1%、3.6%。
3讨论
分别考察以乙腈-0.02mol·L-1乙酸铵溶液为流动相进行梯度洗脱；乙腈-水（23∶77）（用冰醋酸调pH至4.0）；乙腈-水（23∶77）（用冰醋酸调pH至5.0）；0.083mmol/L乙酸胺溶液（pH值5.4）-乙腈-甲醇（45∶35∶20）；水-甲醇-三乙胺（60∶40：0.01）；乙腈-0.08%磷酸溶液（20：80）；0.01mol/L磷酸二氢铵溶液（三乙胺调节pH6.0）-乙腈为流动相，梯度洗脱；0.05mol·L-1磷酸二氢钠溶液（用磷酸调节pH值至2.7）-乙腈（54∶46）；0.02 mol·L-1磷酸二氢钾（氢氧化钠调pH至6.5）-乙腈（5∶1）不同比例的流动相，结果以0.01mol/L磷酸二氢铵溶液（三乙胺调节pH6.0）-乙腈为流动相，梯度洗脱，供试品各峰分离效果最好。此方法可用于琥乙红霉素片中红霉素的含量测定。
参考文献：
[1]罗意文，姚苑梅，李成.高效液相色谱法测定红霉素眼膏的含量[J].中国实用医药.2006（06）
[2]李成，徐玉红，吴芳，陈连剑，陈钦镑，魏怡雯. HPLC测定复方红霉素洗剂中红霉素的含量[J]. 现代食品与药品杂志.2006（03）
[3]常一丁，劉艳红，栾国华.HPLC法测定红霉素肠溶片中红霉素的含量[J].当代医学（学术版）.2008（02）
[4]阚家义，屈建.HPLC法同时测定复方罗红霉素片中盐酸氨溴索与罗红霉素的含量[J].中国新药杂志.2009（02）
[5]邓水德.高效液相色谱法与微生物法测定罗红霉素软膏含量的比较[J].中国现代应用药学.2003（05）
[6]陈莹，陈辉，林谷园，林荆，江滨炜，吴文凡.超高效液相色谱串联质谱法对鳗鱼中大环内酯类、喹诺酮类和磺胺类兽药残留量的同时测定[J].分析测试学报.2008（05）