【摘 要】
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为了构建HSP72慢病毒表达载体,建立稳定表达HSP72的牛乳腺上皮细胞系。以牛HSP72基因序列为模板,设计并合成引物,PCR扩增目的基因,连接到慢病毒表达质粒中,用包装获得的慢病
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(31502138,31572590,31772815),山东省高校科技计划项目(J15LF03),青岛农业大学研究生创新计划项目(QYC201710),山东省现代农业产业技术体系创新团队项目(SDAIT-09-03).
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为了构建HSP72慢病毒表达载体,建立稳定表达HSP72的牛乳腺上皮细胞系。以牛HSP72基因序列为模板,设计并合成引物,PCR扩增目的基因,连接到慢病毒表达质粒中,用包装获得的慢病毒感染牛乳腺上皮细胞,经一定浓度的嘌呤霉素筛选,Hochest33342法对细胞核定位,倒置荧光显微镜下观察转染效率,用免疫组化和Western Blot方法验证感染细胞是否稳定表达HSP72。结果显示,携带HSP72基因的慢病毒滴度约为1.0×10^9TU/mL;确定嘌呤霉素的最佳筛选浓度为2μg/mL;牛HSP7
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