【摘 要】
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目的研究半胱氨酰白三烯受体1(Cys LTR1)蛋白的羧基端核定位序列以及CYSLTR1刺激剂和拮抗剂对其核转位过程的影响。方法首先构建Cys LTR1野生型重组质粒p EGFP-C1/CYSLTR1WT
【机 构】
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第四军医大学西京医院检验科; 第三军医大学西南医院皮肤科; 第四军医大学西京皮肤医院;
【基金项目】
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陕西省自然科学基金基础研究计划(2014JM4091)
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目的研究半胱氨酰白三烯受体1(Cys LTR1)蛋白的羧基端核定位序列以及CYSLTR1刺激剂和拮抗剂对其核转位过程的影响。方法首先构建Cys LTR1野生型重组质粒p EGFP-C1/CYSLTR1WT、含NLS序列的重组质粒p EGFP-C1/NLS及其突变型重组质粒p EGFP-C1/CYSLTR1-d NLS和p EGFP-C1/CYSLTR1-r NLS,转染人角质形成细胞后,通过激光共聚焦显微镜观察转染后24h、48h、72h时,以及分别加入Cys LTR1刺激剂LTD4或其选择性拮抗剂MK571后Cys LTR1的核转位情况。结果 p EGFP-C1/CYSLTR1WT和p EGFP-C1/NLS在细胞核内的荧光强度增加与转染时间呈正相关,其细胞核内荧光强度占细胞内总荧光强度的比率与p EGFP-C1/CYSLTR1-d NLS和p EGFP-C1/CYSLTR1-r NLS转染组比较差异有统计学意义(P均<0.05);加入刺激剂LTD4后,也得到同样结果;加入选择性拮抗剂MK571后,p EGFP-C1/CYSLTR1WT在细胞核内的荧光强度无明显变化,其细胞核内荧光强度占细胞内总荧光强度的比率与p EGFP-C1/NLS、p EGFP-C1/CYSLTR1-d NLS和p EGFP-C1/CYSLTR1-r NLS转染组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。结论 Cys LTR1中的羧基端序列RKHSLSSVTYVPRKK是一个重要的核转位序列,在Cys LTR1刺激剂LTD4可促进Cys LTR1发生核转位,其选择性拮抗剂MK571可阻断其发生核转位。
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