【摘 要】
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目的:解旋酶样转录因子(HLTF)在人体细胞的DNA复制压力应对中发挥重要作用,对其结构和功能的研究需要大量、高纯度且折叠正确的蛋白质.方法:通过优化HLTF基因的密码子偏好,构建HLTF蛋白的大肠杆菌表达系统;通过亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤层析等方法纯化HLTF;采用体外实验研究HLTF的生化活性.结果:成功构建HLTF蛋白的大肠杆菌表达系统,通过一个4步的纯化,获得高纯度的HLTF蛋白质,体外功能实验表明大肠杆菌表达的HLTF具有完整的生化活性,提示蛋白折叠正确.本研究发现HLTF的泛素连接酶活
【机 构】
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天津医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系,天津300070
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目的:解旋酶样转录因子(HLTF)在人体细胞的DNA复制压力应对中发挥重要作用,对其结构和功能的研究需要大量、高纯度且折叠正确的蛋白质.方法:通过优化HLTF基因的密码子偏好,构建HLTF蛋白的大肠杆菌表达系统;通过亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤层析等方法纯化HLTF;采用体外实验研究HLTF的生化活性.结果:成功构建HLTF蛋白的大肠杆菌表达系统,通过一个4步的纯化,获得高纯度的HLTF蛋白质,体外功能实验表明大肠杆菌表达的HLTF具有完整的生化活性,提示蛋白折叠正确.本研究发现HLTF的泛素连接酶活性对底物与泛素的连接方式有较大的容忍度.结论:建立了一种高效制备大量、高纯度且折叠正确的HLTF的方法,为深入理解其泛素连接酶活性提供线索,为其结构和功能研究奠定基础.
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