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摘要：本文通过对桑叶多糖的提取方法对比，得出超声波辅助浸提法收率最高，多糖含量可以达到5.32%。同时对超声波法辅助浸提工艺的3个因素3个水平的正交实验考察得知超声波辅助浸提法法对桑叶多糖含量影响最大的因素为提取次数。在这3个因素中其影响程度的排序是提取次数>提取时间>固液比。而最佳提取条件的组合是固液比1：15，提取次数2次，提取时间为1.5-2.0h。在最佳条件下，桑叶多糖提取收率可以达到21.56%。
关键词：桑叶多糖 提取 超声波 工艺
中图分类号：TQ28 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2014）02-0022-03
桑叶椒桑科植物桑在叶子，有名家桑、荆桑、黄桑叶等，全国各地基本都有生产。药用一般认为桑叶性味苦、甘、寒、有散风祛热功效，我国桑叶资源丰富，若能加以有效利用从桑叶中提取天然药用有效成分如桑叶多糖等制备药品或保健品，有着很重大的意义。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
干桑叶：无极限（中国）有限公司提供。FA2004N 型分析天平，上海精密科学仪器有限公司；超声波清洗器（K1-250DE（功率250W），昆山市超声仪器有限公司；DZKW-D-2电热恒温水浴锅，北京市永光明医疗仪器厂；XW-80A微型旋涡混合仪，上海泸西分析仪器厂；XFB-200/400小型粉碎机，湖南中诚制药机械厂
1.2 实验方法
（1）本文设计桑叶多糖的制备工艺流程见图1：
（2）桑叶多糖测定。
精密量取1mL提取液，加入乙醇12mL，摇匀，室温放置12h，取出，离心，倾去上清液，沉淀用2mL95%乙醇溶液洗涤1次，离心。用水将上述不溶物转移至50mL容量瓶中，水浴溶解，加水稀释至刻度，摇匀，稀释十倍，此溶液为样品测定液。
分别吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL标准葡萄糖溶液（50mg/mL）置玻璃试管中，用蒸馏水补至1mL，再加入5%苯酚溶液0.5mL，混匀后迅速加入2.5mL浓硫酸，使用漩涡振荡器使反应液充分混合，然后将试管置于沸水浴中反应15min，490nm测吸光度，以葡萄糖质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。根据样品测定的吸光度值查找标准曲线计算多糖的量。
标准葡萄糖标准曲线见图2：
（3）桑叶多糖得率。
多糖提取液用滤布过滤，滤液浓缩到50mL后，经14000r/min，离心10min，将上清定容到50mL，取5mL上清液冻干，计算得率，另取1mL上清液用苯酚硫酸法测提取液中的多糖含量。
得率公式：Y=/×100%
式中：为提出多糖沉淀总量（g）
为原料决明子样品质量（g）
2 结果与讨论
2.1 不同方法对桑叶多糖收率的影响
称量5.0000g40目的干桑叶颗粒，在温度为85℃，提取时间为1h，固液比为1：40，提取次数为3次的条件下，分别在有超声波和无超声波实验得到桑叶多糖提取情况如下表1所示：
（1）超声波辅助法与超声波条件的选择。称量5.0000g40目的桑叶颗粒，固液比为1：40。作用时间为25min。在超声波细胞破碎机的辅助下，本文实验桑叶多糖提取情况如下图3所示：
超声波功率的选择实验：分别称取4份约5.0000g40目的桑叶材料，1：40的比例加水，分别置于50W，100W，150W，200W的功率下超声20min，然后按照上述的多糖检测的方法进行检测，选择总糖含量最高的功率。
由上图可以看出，超声波功率为50W的多糖含量是最大的。
（2）超声时间的选择实验。
在上述实验中选出最好的超声功率，其他的条件不变，置于不同的超声时间10min，15min，20min，25min，30min，40min，50min下进行实验。得出如图4所示：
从图4可以看出，超声波辅助时间在20-25min之间浸提效果最好。
2.2 超声波法辅助提取桑叶多糖正交实验
在功率50w下，进行水浸提。选用3个比较合理因素进行正交试验的探究，分别是固液比、提取时间、提取次数，对此进行三个水平的探究，分别得到如表4、5所示：
从上表可以看出，工艺影响因素顺序为：RA>RC>RB对桑叶多糖含量影响的排序是提取次数>提取时间>固液比。由上表可以看出最佳提取条件的组合是：因子A（提取次数），提取一次的提取率较提取二次的提取率低很多，而提取二次和提取三次的差别不大，结合因子的显著差异性及生产成本的控制，选择提取二次较为合理；对因子B（料水比），由于其不显著，结合目前的工艺，不改变原配方的料水比，仍选取料水比为1：15；对因子C（提取时间），根据显著差异最优条件选择，选取提取时间分为： 1.5-2h。
3 结论与展望
本文通过对桑叶多糖的提取方法对比，得出超声波辅助浸提法收率最高，可以达到5.32%。同时对超声波法辅助浸提工艺的3个因素3个水平的正交实验考察得知超声波辅助浸提法法对桑叶多糖含量影响最大的因素为提取次数。在这3个因素中其影响程度的排序是提取次数>提取时间>固液比。而最佳提取条件的组合是固液比1：15，提取次数两次，提取时间为 1.5-2.0h。在最佳条件下，桑叶多糖提取收率可以达到21.56%。
本文的研究成果对桑叶多糖提取研究和生产有一定的理论依据。与此同时，也希望在此基础上可以进一步研究桑叶多糖的结构及其生物活性和多糖检测方法的重现性。
参考文献
[1]范继善，韩锡光等.实用食品添加剂&天津科学技术出版社，1993，10：322-333.
[2]杜力军，孙虹等.荷叶大豆及其合剂调脂活性部位的研究中草药，2000，31（7）：526-528.
[3]刘树兴等.桑叶多糖提取工艺研究，现代食品科技，2005，11，153-155.
[4]刘树兴等.树脂法纯化桑叶多糖研究，食品科技，2005.11，38-40.
关键词：桑叶多糖 提取 超声波 工艺
中图分类号：TQ28 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2014）02-0022-03
桑叶椒桑科植物桑在叶子，有名家桑、荆桑、黄桑叶等，全国各地基本都有生产。药用一般认为桑叶性味苦、甘、寒、有散风祛热功效，我国桑叶资源丰富，若能加以有效利用从桑叶中提取天然药用有效成分如桑叶多糖等制备药品或保健品，有着很重大的意义。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
干桑叶：无极限（中国）有限公司提供。FA2004N 型分析天平，上海精密科学仪器有限公司；超声波清洗器（K1-250DE（功率250W），昆山市超声仪器有限公司；DZKW-D-2电热恒温水浴锅，北京市永光明医疗仪器厂；XW-80A微型旋涡混合仪，上海泸西分析仪器厂；XFB-200/400小型粉碎机，湖南中诚制药机械厂
1.2 实验方法
（1）本文设计桑叶多糖的制备工艺流程见图1：
（2）桑叶多糖测定。
精密量取1mL提取液，加入乙醇12mL，摇匀，室温放置12h，取出，离心，倾去上清液，沉淀用2mL95%乙醇溶液洗涤1次，离心。用水将上述不溶物转移至50mL容量瓶中，水浴溶解，加水稀释至刻度，摇匀，稀释十倍，此溶液为样品测定液。
分别吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL标准葡萄糖溶液（50mg/mL）置玻璃试管中，用蒸馏水补至1mL，再加入5%苯酚溶液0.5mL，混匀后迅速加入2.5mL浓硫酸，使用漩涡振荡器使反应液充分混合，然后将试管置于沸水浴中反应15min，490nm测吸光度，以葡萄糖质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。根据样品测定的吸光度值查找标准曲线计算多糖的量。
标准葡萄糖标准曲线见图2：
（3）桑叶多糖得率。
多糖提取液用滤布过滤，滤液浓缩到50mL后，经14000r/min，离心10min，将上清定容到50mL，取5mL上清液冻干，计算得率，另取1mL上清液用苯酚硫酸法测提取液中的多糖含量。
得率公式：Y=/×100%
式中：为提出多糖沉淀总量（g）
为原料决明子样品质量（g）
2 结果与讨论
2.1 不同方法对桑叶多糖收率的影响
称量5.0000g40目的干桑叶颗粒，在温度为85℃，提取时间为1h，固液比为1：40，提取次数为3次的条件下，分别在有超声波和无超声波实验得到桑叶多糖提取情况如下表1所示：
（1）超声波辅助法与超声波条件的选择。称量5.0000g40目的桑叶颗粒，固液比为1：40。作用时间为25min。在超声波细胞破碎机的辅助下，本文实验桑叶多糖提取情况如下图3所示：
超声波功率的选择实验：分别称取4份约5.0000g40目的桑叶材料，1：40的比例加水，分别置于50W，100W，150W，200W的功率下超声20min，然后按照上述的多糖检测的方法进行检测，选择总糖含量最高的功率。
由上图可以看出，超声波功率为50W的多糖含量是最大的。
（2）超声时间的选择实验。
在上述实验中选出最好的超声功率，其他的条件不变，置于不同的超声时间10min，15min，20min，25min，30min，40min，50min下进行实验。得出如图4所示：
从图4可以看出，超声波辅助时间在20-25min之间浸提效果最好。
2.2 超声波法辅助提取桑叶多糖正交实验
在功率50w下，进行水浸提。选用3个比较合理因素进行正交试验的探究，分别是固液比、提取时间、提取次数，对此进行三个水平的探究，分别得到如表4、5所示：
从上表可以看出，工艺影响因素顺序为：RA>RC>RB对桑叶多糖含量影响的排序是提取次数>提取时间>固液比。由上表可以看出最佳提取条件的组合是：因子A（提取次数），提取一次的提取率较提取二次的提取率低很多，而提取二次和提取三次的差别不大，结合因子的显著差异性及生产成本的控制，选择提取二次较为合理；对因子B（料水比），由于其不显著，结合目前的工艺，不改变原配方的料水比，仍选取料水比为1：15；对因子C（提取时间），根据显著差异最优条件选择，选取提取时间分为： 1.5-2h。
3 结论与展望
本文通过对桑叶多糖的提取方法对比，得出超声波辅助浸提法收率最高，可以达到5.32%。同时对超声波法辅助浸提工艺的3个因素3个水平的正交实验考察得知超声波辅助浸提法法对桑叶多糖含量影响最大的因素为提取次数。在这3个因素中其影响程度的排序是提取次数>提取时间>固液比。而最佳提取条件的组合是固液比1：15，提取次数两次，提取时间为 1.5-2.0h。在最佳条件下，桑叶多糖提取收率可以达到21.56%。
本文的研究成果对桑叶多糖提取研究和生产有一定的理论依据。与此同时，也希望在此基础上可以进一步研究桑叶多糖的结构及其生物活性和多糖检测方法的重现性。
参考文献
[1]范继善，韩锡光等.实用食品添加剂&天津科学技术出版社，1993，10：322-333.
[2]杜力军，孙虹等.荷叶大豆及其合剂调脂活性部位的研究中草药，2000，31（7）：526-528.
[3]刘树兴等.桑叶多糖提取工艺研究，现代食品科技，2005，11，153-155.
[4]刘树兴等.树脂法纯化桑叶多糖研究，食品科技，2005.11，38-40.