【摘 要】
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枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中的hemA基因编码谷氨酰tRNA还原酶,该酶是B.subtilis代谢途径中由谷氨酸到5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)反应的限速酶。将B.subtilis的hemA基因克
【机 构】
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西北农林科技大学动物科技学院,湖北工业大学生物工程学院,武汉阳光广济医药开发有限公司
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枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中的hemA基因编码谷氨酰tRNA还原酶,该酶是B.subtilis代谢途径中由谷氨酸到5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)反应的限速酶。将B.subtilis的hemA基因克隆到pET28a载体上,并在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE电泳分析,表达的目的蛋白占总蛋白的20%。通过分离纯化得到谷氨酰tRNA还原酶。重组菌发酵液上清中5-ALA含量达40.2mg/L,菌液呈红色,过筛试验和紫外分光光度检测验证显色物质为卟啉类,实验表明,表达的重组蛋白促进了5-ALA的合成和代谢。
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