8-Br-cAMP对人视网膜母细胞瘤HXO-Rb44细胞癌基因的表达效应

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目的研究8BrcAMP对培养的人视网膜母细胞瘤HXORb44细胞癌基因表达的效应及其与该细胞生长的关系。方法cfosmRNA、NmycmRNA及p21rasmRNA均以原位杂交和RNA斑点印迹技术检测,对繁殖细胞核抗原(PCNA)、cFos、NMyc和P21ras蛋白表达的免疫反应性(IR)则采用免疫组化及蛋白质斑点印迹技术检测。结果在人HXORb44细胞,cfosmRNA、NmycmRNA及p21rasmRNA定位于胞质,cFosIR及NMycIR定位于胞核,而P21rasIR则位于胞质。斑点印迹的相对扫描数值显示实验组(8BrcAMP处理)均低于相应各对照组(未经8BrcAMP处理),P<0.05~0.01。结论(1)8BrcAMP可抑制人HXORb44细胞的生长增殖;(2)8BrcAMP可下调cfos、Nmyc及p21ras癌基因的表达;(3)8BrcAMP也可下调cFos、NMyc及P21ras蛋白的表达,而且其变动各与其mRNA基因表达的变动相一致;(4)结果提示8BrcAMP可能从不同的途径而协同抑制HXORb44细胞的生长增殖。 Objective To study the effect of 8BrcAMP on oncogene expression in cultured human retinoblastoma HXORb44 cells and its relationship with the cell growth. Methods c  fos mRNA, N  mycm RNA and p21rasmRNA were detected by in situ hybridization and RNA dot blot technique. The immunoreactivity (IR) to the expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA), cFos, NMyc and P21ras protein Immunohistochemistry and protein blotting detection. Results In human HXORb44 cells, cfosmRNA, NmycmRNA and p21rasmRNA were located in the cytoplasm, cFosIR and NMycIR were located in the nucleus, whereas P21rasIR was located in the cytoplasm. Dot blot relative scanning values ​​show that the experimental group (8  BrcAMP treatment) were lower than the corresponding control group (without 8  BrcAMP treatment), P <0.05 ~ 0.01. (2) 8BrcAMP down-regulated cfos, Nmyc and p21ras oncogene expression; (3) 8BrcAMP can inhibit the growth and proliferation of human HXORb44 cells; CAMP also down-regulated c-Fos, N-Myc and P21ras protein expression, and its changes were consistent with the changes of its mRNA gene expression; (4) The results suggest that 8  BrcAMP may synergistically inhibit HXO from different ways  Rb44 cell growth and proliferation.
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