目的 用携带HCV复制子的Huh-7.5细胞探讨HCV复制对沉默信息调节因子1(SIRT1)表达及肝细胞脂类代谢的影响.方法 实验分为Huh-7.5细胞、复制子细胞和干扰素处理的复制子细胞3组.应用流式细胞仪、比色法测定细胞活性氧(ROS)变化和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)+/NADH比值变化.应用液体闪烁计数仪、实时荧光定量-PCR (RT-PCR)、Western blot检测SIRT1活性、mRNA及蛋白的表达.RT-PCR检测SIRT1下游调节脂类代谢基因的mRNA水平.试剂盒检测甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)的含量,液体闪烁计数仪检测脂肪酸β氧化速度,Westem blot检测HCV非结构蛋白5A表达水平.计量资料两组间比较用t检验,三组间比较用单因素方差分析.结果 与Huh-7.5细胞相比,复制子细胞ROS水平增加(3.8±0.5与1.0±0.2,t=12.736,P＜0.01),NAD+/NADH比值下降(0.03±0.01与0.12±0.03,t=6.971,P＜0.01).与Huh-7.5细胞和IFN处理的复制子细胞相比,复制子细胞SIRT1的活性下降(0.3±0.1与1.0±0.2、0.9±0.2,F=6.766,P＜0.01)、mRNA水平下降(0.4±0.1与1.0±0.3、0.9±0.2,F=5.864,P＜ 0.01)和蛋白水平下降(0.3±0.1与0.8±0.2、0.9±0.2,F=5.419,P＜0.01);叉头蛋白转录因子(FoxO1)磷酸化水平下降(0.2±0.1与0.5±0.1、0.6±0.2,F=4.534,P＜ 0.05),固醇调节元件结合蛋白-1c基因表达水平上升(1.8±0.4与1.0±0.3、0.9±0.3,F=4.091,P＜0.05),而TG(F=6.670,P＜0.01)和TC (F=5.789,P＜0.01)合成增加；过氧化物酶体增殖物活化受体α基因表达水平下降(0.4±0.1与1.0±0.3、0.9±0.3,F=5.897,P＜ 0.01),脂肪酸β氧化速度下降(0.4±0.1与1.0±0.3、0.9±0.3,F=5.123,P＜0.01).与未处理或SIRT1激动剂处理组相比,SIRT1抑制剂处理复制子细胞72h后HCV非结构蛋白5A表达水平明显增加(1.90±0.45与1.0±0.15、0.20±0.06,F=13.765,P＜0.01).结论 HCV复制降低NAW/NADH比值,下调SIRT1活性及表达,改变其下游调节脂类代谢相关基因表达,增加脂肪酸合成,降低脂肪酸氧化,导致肝细胞脂类代谢紊乱,促进HCV复制。
沉默信息调节因子1受抑制导致肝细胞脂类代谢紊乱促进丙型肝炎病毒复制
【摘 要】
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目的 用携带HCV复制子的Huh-7.5细胞探讨HCV复制对沉默信息调节因子1(SIRT1)表达及肝细胞脂类代谢的影响.方法 实验分为Huh-7.5细胞、复制子细胞和干扰素处理的复制子细胞3组.应用流式细胞仪、比色法测定细胞活性氧(ROS)变化和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)+/NADH比值变化.应用液体闪烁计数仪、实时荧光定量-PCR (RT-PCR)、Western blot检测SIRT1活性
【机 构】
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150086哈尔滨医科大学附属第二医院感染病科,150086哈尔滨医科大学附属第二医院感染病科,150086哈尔滨医科大学附属第二医院感染病科,150086哈尔滨医科大学附属第二医院感染病科,1500
【出 处】
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中华肝脏病杂志
【发表日期】
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2013年21期
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