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制备鼠抗重组跨膜四蛋白33 (TSPAN33)抗体并验证TSPAN33在桥本氏甲状腺炎外周血B细胞中的表达。
方法通过PCR法从霍奇金淋巴瘤细胞的cDNA中扩增TSPAN33基因，并构建到pET32a表达载体中。使用IPTG诱导重组蛋白的表达，通过镍柱亲和层析纯化获得TSPAN33蛋白。以纯化的TSPAN33蛋白混合福氏完全佐剂免疫Balb/c小鼠制备抗体，通过合成TSPAN33胞外区肽段耦联环氧基磁珠，亲和富集抗TSPAN33胞外区特异性IgG，洗脱得抗体用酶联免疫吸附实验(ELISA)和Western blot分别检测效价和特异性。同时使用制备的抗体初步对桥本氏甲状腺炎(HT)患者外周血TSPAN33＋B细胞比例进行检测。
结果成功的表达、纯化了TSPAN33重组蛋白，抗TSPAN33蛋白免疫后血清通过固相肽段亲和富集纯化后抗体效价为1∶64 000，Western blot和流式细胞术分析显示该纯化抗体不但能够与TSPAN33蛋白特异性的结合，同时还能够和天然的TSPAN33结合，流式细胞术结果显示HT患者外周血TSPAN33＋B细胞比例为(4.71±0.43)%，高于健康组(1.95±0.36)% (P<0.01)。
结论以重组TSPAN33为免疫原，成功地制备高效价、高特异性的兔抗TSPAN33抗体，为进一步进行TSPAN33的检测及其临床应用研究奠定了基础。