【摘 要】
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[背景]唾液酸苷酶是一类水解唾液酸糖复合物末端唾液酸残基的糖苷水解酶,广泛存在于动物和微生物中,具有重要的生物学功能.[目的]克隆一个长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)唾液酸苷酶基因(blsia42)并在大肠杆菌(Escherichia coli)中表达,探讨该重组酶的酶学性质.[方法]从长双歧杆菌中克隆唾液酸苷酶基因(blsia42),构建重组表达质粒pET-28a-blsia42并在大肠杆菌BL21(DE3)中异源表达.BlSia42粗酶液经Ni-NTA亲和层析纯化后研究其酶学
【机 构】
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中国农业大学工学院中国轻工业食品生物工程重点实验室,北京100083;中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京100083
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[背景]唾液酸苷酶是一类水解唾液酸糖复合物末端唾液酸残基的糖苷水解酶,广泛存在于动物和微生物中,具有重要的生物学功能.[目的]克隆一个长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)唾液酸苷酶基因(blsia42)并在大肠杆菌(Escherichia coli)中表达,探讨该重组酶的酶学性质.[方法]从长双歧杆菌中克隆唾液酸苷酶基因(blsia42),构建重组表达质粒pET-28a-blsia42并在大肠杆菌BL21(DE3)中异源表达.BlSia42粗酶液经Ni-NTA亲和层析纯化后研究其酶学性质.[结果]BlSia42纯酶的比酶活为164935.2 U/mg.SDS-PAGE法和凝胶过滤法测定B1Sia42的分子量分别为42.8 kDa和41.5 kDa.该酶的最适pH和温度分别为6.0和50℃,在pH 3.5-9.0和45℃以下稳定.B1Sia42底物特异性广泛,对α2,3、α2,6和α2,8糖苷键均显示出水解活性,对3 \'-唾液酸乳糖和多聚唾液酸的水解活性分别为6\'-唾液酸乳糖水解活性的87.50％和67.19％.B1Sia42水解多聚唾液酸12 h后,唾液酸浓度为2.4 g/L,水解率为23.6％.[结论]唾液酸苷酶BlSia42优良的酶学特性使其在唾液酸及其衍生物的制备中具有潜在的应用价值.
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[目的]利用一个GFP的超折叠变体SfGFP (superfolder GFP)对瓦雷兹芽孢杆菌(Bacillus velezensis) FZB42菌株进行标记,以期确立一种瓦雷兹芽孢杆菌及近缘芽孢杆菌通用的高亮GFP标记手段,同时,为了方便后续生物膜和分子互作的相关研究,测试SfGFP基因插入位点,假基因xkdB,作为外源基因表达座位的可行性.[方法]利用基因工程技术构建了一系列质粒,然后通过同源重组的方式,分别获得xkdB敲除菌株FBS373和SfGFP标记菌株FBS374,分别测试这些菌株在生长速
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