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【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】1632-5281(2015)8
[摘要] 目的:建立气相色谱法测定噶古拉-4滴丸中丁香酚含量的方法。方法:色谱柱为 (30m×0.25mm,0.25μm),检测器为氢离子火焰检测器,程序升温,进样口的温度为200℃,检测器温度为310℃,载气为氮气,流量为0.84mL.min-1,分流比为10:1,内标物为苯酚。结果:丁香酚在0.1-2.5μg范围内线性关系良好,平均加样回收率96.66%,RSD为1.42%(n=6)。结论:方法可靠,结果准确,为进一步提高噶古拉-4滴丸的质量控制方法打下了基础。
[关键词] 噶古拉-4;丁香酚;气相色谱法;含量测定。
嘎古拉-4汤是在蒙医临床上常用蒙成药之一, 由草果仁、木香、丁香和小茴香4味药材组成。 具有调节 “赫依” ,具有镇静、镇痛、健脾胃的功能[1]。根据文献资料报道嘎古拉-4中富含挥发油,其中丁香酚含量较高,可以作为丁香的质量控制指标,因此选择丁香酚作为噶古拉-4含量测定的指标成分具有实际意义和应用价值[2]。
1材料
1.1仪器
日本岛津GC2014C气相色谱仪(FID检测器),AOC-20i自动进样器,GC solution 色谱工作站;德国赛多利斯ALC-11C.4型电子天平;KQ500-DE 超声处理器。
1.2药品与试剂
丁香、木香、草果仁、小茴香等 4味蒙药材由北京同仁堂药店提供, 符合《内蒙古蒙成药标准》 1984年版有关规定; 嘎古拉-4滴丸按处方比例自制;丁香酚对照品(批号:110725-201213)和苯酚对照品(批号:110115-201112)均由中国药品生物制品检定所提供;所用试剂均为分析纯。
2 实验方法与结果
2.1色谱条件与系统适用性试验:
色谱柱:毛细管柱(30m×0.25mm,0.25μm);FID检测器;程序升温: 初始温度为120℃ ,保持2min, 每分钟 17℃升至 200℃,保持4min,再每分钟 17℃升至 230℃, 保持 1 min。分流比为 10∶1。理论塔板数按丁香酚计应不低于2000,丁香酚和相邻峰的分离度应大于1.5[3]。
2.2对照品和供试品溶液的制备:
2.2.1对照品溶液:精密称取丁香酚对照品适量,置于10mL容量瓶中,无水乙醇溶解并稀释至刻度,作为储备液。取1mL至10mL容量瓶中,无水乙醇稀释至刻度,再取2mL至10mL容量瓶中,无水乙醇稀释至刻度,浓度为1.043 mg.mL-1。
另取内标物对照品适量,用无水乙醇配置成浓度为1.024mg.mL-1的内标溶液。
2.2.2供试品溶液:取噶古拉-4滴丸,研成粉末,精密称定1g,置于100mL的锥形瓶中,加无水乙醇20mL,密塞,称定质量,超声提取30min,取出,放至室温,再称定质量,用无水乙醇补足减失的质量,摇匀,静置,取上层溶液,用0.45μm微孔滤膜过滤,加入内标溶液 0.5 mL,用无水乙醇稀释至刻度,摇匀,得供试品溶液。
2.2.3阴性对照液的制备:取照本品的处方及制法制成的仅缺丁香的阴性对照品1.0g ,精密称定, 照供试品溶液的制备方法操作。
2.4 线性关系的考察
精密吸取丁香酚对照品溶液0.5 mL、1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5mL、6 mL,置10 mL 容量瓶中,精密加入内标溶液1mL ,用无水乙醇稀释至刻度,按上述条件和方法进样1μL测定峰面积。 以对照品与内标的浓度比(X)为横坐标,对照品与内标峰面积比(Y)为纵坐标绘制标准曲线,其回归方程为 Y=1. 445 6X+0. 0331 , r =0. 999 6。结果表明,在上述色谱条件下丁香酚进样量在 0.0 ~ 2.13 mg/mL范围内与峰面积比呈良好的线性关系。
2.5精密度试验
精密吸取同一份对照品溶液1μL,注入气相色谱仪,重复进样6次,测定峰面积,计算丁香酚峰面积与内标峰面积的比值。结果测得丁香酚峰面积与内标峰面积比值的RSD为0.87%(n=6),表明仪器精密度试验符合有关规定。
2.6重复性试验
按照“2.2”项下的方法制备供试品溶液6份,各精密吸取1μL进样,按上述的色谱条件测定丁香酚峰面积与内标峰面积比值并计算含量。结果丁香酚平均含量为0.639mg.mL-1, RSD为 1.24%,表明本方法重复性良好。
2.7稳定性试验
精密吸取同一供试液1μL , 注入气相色谱仪,按上述色谱条件在0、2、4、6、8、12、24小时测定峰面积进行稳定性考察,计算丁香酚峰面积与内标峰面积的比值。结果在24h内测定7次,数据稳定, RSD为 0.74%,表明供试品溶液在24h内稳定。
2.8回收率试验
采用加样回收法,精密称取同一批号已知含量的样品1g,共6份,分别精密加入丁香酚对照品溶液(1.043mg.mL-1)各1 mL,按照“2.2”项下的方法制备供试品溶液,制成回收率用供试品溶液,在上述色谱条件下测定样品中丁香酚的含量,计算加样回收率,结果平均回收率为96.66%,RSD为1.42%(n=6)。
2.9 样品含量测定结果
精密称取1g,取3份,按照“2.2”供试品溶液制备方法操作。按“2.1”色谱条件分析,进样量为1μL,测定每份样品中丁香酚的含量并计算,取平均值。结果见表2
4、讨论
嘎古拉-4汤是在蒙医临床上常用蒙成药之一,制剂中草果仁、木香、丁香和小茴香 4味药材均主要含有挥发性成分,故本实验以苯酚内标物, 采用GC内标法进行含量测定。运用气相色谱法测定蒙成药噶古拉-4滴丸中丁香酚含量的方法未见报道,本课题使用无水乙醇超声提取挥发性成分丁香酚,建立了测定噶古拉-4中丁香酚含量的气相色谱检测方法,本方法样品处理过程简单,色谱峰分离度良好,该法灵敏、稳定,为有效控制噶古拉-4的质量提供了新的依据。
参考文献:
[1] 内蒙古自治区卫生厅编.内蒙古成药标准[ S ] .赤峰:内蒙古科技出版社;1984:259.
[2] 中国药典2010年版一部[ S ] .2010.
[3] 周羽琪.气相色谱法测定经不痛巴布膏中丁香酚的含量[ J ].中成药, 2002, 24( 5) : 347.
作者简介:
1.文秀云 女 汉族 1971.09生人, 通辽职业学院副教授,学历本科,药学专业,研究方向药剂。
2.王莹 女 汉族,1982.05生人,通辽市人,通辽职业学院讲师,研究方向:药物分析
项目基金:本文系内蒙古自治区高等学校科学研究项目课题《蒙药噶古拉—4滴丸成型工艺研究》。课题编号:NJZY12300。
[摘要] 目的:建立气相色谱法测定噶古拉-4滴丸中丁香酚含量的方法。方法:色谱柱为 (30m×0.25mm,0.25μm),检测器为氢离子火焰检测器,程序升温,进样口的温度为200℃,检测器温度为310℃,载气为氮气,流量为0.84mL.min-1,分流比为10:1,内标物为苯酚。结果:丁香酚在0.1-2.5μg范围内线性关系良好,平均加样回收率96.66%,RSD为1.42%(n=6)。结论:方法可靠,结果准确,为进一步提高噶古拉-4滴丸的质量控制方法打下了基础。
[关键词] 噶古拉-4;丁香酚;气相色谱法;含量测定。
嘎古拉-4汤是在蒙医临床上常用蒙成药之一, 由草果仁、木香、丁香和小茴香4味药材组成。 具有调节 “赫依” ,具有镇静、镇痛、健脾胃的功能[1]。根据文献资料报道嘎古拉-4中富含挥发油,其中丁香酚含量较高,可以作为丁香的质量控制指标,因此选择丁香酚作为噶古拉-4含量测定的指标成分具有实际意义和应用价值[2]。
1材料
1.1仪器
日本岛津GC2014C气相色谱仪(FID检测器),AOC-20i自动进样器,GC solution 色谱工作站;德国赛多利斯ALC-11C.4型电子天平;KQ500-DE 超声处理器。
1.2药品与试剂
丁香、木香、草果仁、小茴香等 4味蒙药材由北京同仁堂药店提供, 符合《内蒙古蒙成药标准》 1984年版有关规定; 嘎古拉-4滴丸按处方比例自制;丁香酚对照品(批号:110725-201213)和苯酚对照品(批号:110115-201112)均由中国药品生物制品检定所提供;所用试剂均为分析纯。
2 实验方法与结果
2.1色谱条件与系统适用性试验:
色谱柱:毛细管柱(30m×0.25mm,0.25μm);FID检测器;程序升温: 初始温度为120℃ ,保持2min, 每分钟 17℃升至 200℃,保持4min,再每分钟 17℃升至 230℃, 保持 1 min。分流比为 10∶1。理论塔板数按丁香酚计应不低于2000,丁香酚和相邻峰的分离度应大于1.5[3]。
2.2对照品和供试品溶液的制备:
2.2.1对照品溶液:精密称取丁香酚对照品适量,置于10mL容量瓶中,无水乙醇溶解并稀释至刻度,作为储备液。取1mL至10mL容量瓶中,无水乙醇稀释至刻度,再取2mL至10mL容量瓶中,无水乙醇稀释至刻度,浓度为1.043 mg.mL-1。
另取内标物对照品适量,用无水乙醇配置成浓度为1.024mg.mL-1的内标溶液。
2.2.2供试品溶液:取噶古拉-4滴丸,研成粉末,精密称定1g,置于100mL的锥形瓶中,加无水乙醇20mL,密塞,称定质量,超声提取30min,取出,放至室温,再称定质量,用无水乙醇补足减失的质量,摇匀,静置,取上层溶液,用0.45μm微孔滤膜过滤,加入内标溶液 0.5 mL,用无水乙醇稀释至刻度,摇匀,得供试品溶液。
2.2.3阴性对照液的制备:取照本品的处方及制法制成的仅缺丁香的阴性对照品1.0g ,精密称定, 照供试品溶液的制备方法操作。
2.4 线性关系的考察
精密吸取丁香酚对照品溶液0.5 mL、1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5mL、6 mL,置10 mL 容量瓶中,精密加入内标溶液1mL ,用无水乙醇稀释至刻度,按上述条件和方法进样1μL测定峰面积。 以对照品与内标的浓度比(X)为横坐标,对照品与内标峰面积比(Y)为纵坐标绘制标准曲线,其回归方程为 Y=1. 445 6X+0. 0331 , r =0. 999 6。结果表明,在上述色谱条件下丁香酚进样量在 0.0 ~ 2.13 mg/mL范围内与峰面积比呈良好的线性关系。
2.5精密度试验
精密吸取同一份对照品溶液1μL,注入气相色谱仪,重复进样6次,测定峰面积,计算丁香酚峰面积与内标峰面积的比值。结果测得丁香酚峰面积与内标峰面积比值的RSD为0.87%(n=6),表明仪器精密度试验符合有关规定。
2.6重复性试验
按照“2.2”项下的方法制备供试品溶液6份,各精密吸取1μL进样,按上述的色谱条件测定丁香酚峰面积与内标峰面积比值并计算含量。结果丁香酚平均含量为0.639mg.mL-1, RSD为 1.24%,表明本方法重复性良好。
2.7稳定性试验
精密吸取同一供试液1μL , 注入气相色谱仪,按上述色谱条件在0、2、4、6、8、12、24小时测定峰面积进行稳定性考察,计算丁香酚峰面积与内标峰面积的比值。结果在24h内测定7次,数据稳定, RSD为 0.74%,表明供试品溶液在24h内稳定。
2.8回收率试验
采用加样回收法,精密称取同一批号已知含量的样品1g,共6份,分别精密加入丁香酚对照品溶液(1.043mg.mL-1)各1 mL,按照“2.2”项下的方法制备供试品溶液,制成回收率用供试品溶液,在上述色谱条件下测定样品中丁香酚的含量,计算加样回收率,结果平均回收率为96.66%,RSD为1.42%(n=6)。
2.9 样品含量测定结果
精密称取1g,取3份,按照“2.2”供试品溶液制备方法操作。按“2.1”色谱条件分析,进样量为1μL,测定每份样品中丁香酚的含量并计算,取平均值。结果见表2
4、讨论
嘎古拉-4汤是在蒙医临床上常用蒙成药之一,制剂中草果仁、木香、丁香和小茴香 4味药材均主要含有挥发性成分,故本实验以苯酚内标物, 采用GC内标法进行含量测定。运用气相色谱法测定蒙成药噶古拉-4滴丸中丁香酚含量的方法未见报道,本课题使用无水乙醇超声提取挥发性成分丁香酚,建立了测定噶古拉-4中丁香酚含量的气相色谱检测方法,本方法样品处理过程简单,色谱峰分离度良好,该法灵敏、稳定,为有效控制噶古拉-4的质量提供了新的依据。
参考文献:
[1] 内蒙古自治区卫生厅编.内蒙古成药标准[ S ] .赤峰:内蒙古科技出版社;1984:259.
[2] 中国药典2010年版一部[ S ] .2010.
[3] 周羽琪.气相色谱法测定经不痛巴布膏中丁香酚的含量[ J ].中成药, 2002, 24( 5) : 347.
作者简介:
1.文秀云 女 汉族 1971.09生人, 通辽职业学院副教授,学历本科,药学专业,研究方向药剂。
2.王莹 女 汉族,1982.05生人,通辽市人,通辽职业学院讲师,研究方向:药物分析
项目基金:本文系内蒙古自治区高等学校科学研究项目课题《蒙药噶古拉—4滴丸成型工艺研究》。课题编号:NJZY12300。