论文部分内容阅读
【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】1632-5281（2015）8
[摘要] 目的：建立气相色谱法测定噶古拉-4滴丸中丁香酚含量的方法。方法：色谱柱为 （30m×0.25mm，0.25μm），检测器为氢离子火焰检测器，程序升温，进样口的温度为200℃，检测器温度为310℃，载气为氮气，流量为0.84mL.min-1，分流比为10：1，内标物为苯酚。结果：丁香酚在0.1-2.5μg范围内线性关系良好，平均加样回收率96.66%，RSD为1.42%（n=6）。结论：方法可靠，结果准确，为进一步提高噶古拉-4滴丸的质量控制方法打下了基础。
[关键词] 噶古拉-4；丁香酚；气相色谱法；含量测定。
嘎古拉-4汤是在蒙医临床上常用蒙成药之一， 由草果仁、木香、丁香和小茴香4味药材组成。 具有调节 “赫依” ，具有镇静、镇痛、健脾胃的功能[1]。根据文献资料报道嘎古拉-4中富含挥发油，其中丁香酚含量较高，可以作为丁香的质量控制指标，因此选择丁香酚作为噶古拉-4含量测定的指标成分具有实际意义和应用价值[2]。
1材料
1.1仪器
日本岛津GC2014C气相色谱仪（FID检测器），AOC-20i自动进样器，GC solution 色谱工作站；德国赛多利斯ALC-11C.4型电子天平；KQ500-DE 超声处理器。
1.2药品与试剂
丁香、木香、草果仁、小茴香等 4味蒙药材由北京同仁堂药店提供， 符合《内蒙古蒙成药标准》 1984年版有关规定； 嘎古拉-4滴丸按处方比例自制；丁香酚对照品（批号：110725-201213）和苯酚对照品（批号：110115-201112）均由中国药品生物制品检定所提供；所用试剂均为分析纯。
2 实验方法与结果
2.1色谱条件与系统适用性试验：
色谱柱：毛细管柱（30m×0.25mm，0.25μm）；FID检测器；程序升温： 初始温度为120℃ ，保持2min， 每分钟 17℃升至 200℃，保持4min，再每分钟 17℃升至 230℃， 保持 1 min。分流比为 10∶1。理论塔板数按丁香酚计应不低于2000，丁香酚和相邻峰的分离度应大于1.5[3]。
2.2对照品和供试品溶液的制备：
2.2.1对照品溶液：精密称取丁香酚对照品适量，置于10mL容量瓶中，无水乙醇溶解并稀释至刻度，作为储备液。取1mL至10mL容量瓶中，无水乙醇稀释至刻度，再取2mL至10mL容量瓶中，无水乙醇稀释至刻度，浓度为1.043 mg.mL-1。
另取内标物对照品适量，用无水乙醇配置成浓度为1.024mg.mL-1的内标溶液。
2.2.2供试品溶液：取噶古拉-4滴丸，研成粉末，精密称定1g，置于100mL的锥形瓶中，加无水乙醇20mL，密塞，称定质量，超声提取30min，取出，放至室温，再称定质量，用无水乙醇补足减失的质量，摇匀，静置，取上层溶液，用0.45μm微孔滤膜过滤，加入内标溶液 0.5 mL，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，得供试品溶液。
2.2.3阴性对照液的制备：取照本品的处方及制法制成的仅缺丁香的阴性对照品1.0g ，精密称定， 照供试品溶液的制备方法操作。
2.4 线性关系的考察
精密吸取丁香酚对照品溶液0.5 mL、1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5mL、6 mL，置10 mL 容量瓶中，精密加入内标溶液1mL ，用无水乙醇稀释至刻度，按上述条件和方法进样1μL测定峰面积。 以对照品与内标的浓度比（X）为横坐标，对照品与内标峰面积比（Y）为纵坐标绘制标准曲线，其回归方程为 Y=1. 445 6X+0. 0331 ， r =0. 999 6。结果表明，在上述色谱条件下丁香酚进样量在 0.0 ～ 2.13 mg/mL范围内与峰面积比呈良好的线性关系。
2.5精密度试验
精密吸取同一份对照品溶液1μL，注入气相色谱仪，重复进样6次，测定峰面积，计算丁香酚峰面积与内标峰面积的比值。结果测得丁香酚峰面积与内标峰面积比值的RSD为0.87%（n=6），表明仪器精密度试验符合有关规定。
2.6重复性试验
按照“2.2”项下的方法制备供试品溶液6份，各精密吸取1μL进样，按上述的色谱条件测定丁香酚峰面积与内标峰面积比值并计算含量。结果丁香酚平均含量为0.639mg.mL-1， RSD为 1.24%，表明本方法重复性良好。
2.7稳定性试验
精密吸取同一供试液1μL ， 注入气相色谱仪，按上述色谱条件在0、2、4、6、8、12、24小时测定峰面积进行稳定性考察，计算丁香酚峰面积与内标峰面积的比值。结果在24h内测定7次，数据稳定， RSD为 0.74%，表明供试品溶液在24h内稳定。
2.8回收率试验
采用加样回收法，精密称取同一批号已知含量的样品1g，共6份，分别精密加入丁香酚对照品溶液（1.043mg.mL-1）各1 mL，按照“2.2”项下的方法制备供试品溶液，制成回收率用供试品溶液，在上述色谱条件下测定样品中丁香酚的含量，计算加样回收率，结果平均回收率为96.66%，RSD为1.42%（n=6）。
2.9 样品含量测定结果
精密称取1g，取3份，按照“2.2”供试品溶液制备方法操作。按“2.1”色谱条件分析，进样量为1μL，测定每份样品中丁香酚的含量并计算，取平均值。结果见表2
4、讨论
嘎古拉-4汤是在蒙医临床上常用蒙成药之一，制剂中草果仁、木香、丁香和小茴香 4味药材均主要含有挥发性成分，故本实验以苯酚内标物， 采用GC内标法进行含量测定。运用气相色谱法测定蒙成药噶古拉-4滴丸中丁香酚含量的方法未见报道，本课题使用无水乙醇超声提取挥发性成分丁香酚，建立了测定噶古拉-4中丁香酚含量的气相色谱检测方法，本方法样品处理过程简单，色谱峰分离度良好，该法灵敏、稳定，为有效控制噶古拉-4的质量提供了新的依据。
参考文献：
[1] 内蒙古自治区卫生厅编.内蒙古成药标准[ S ] .赤峰：内蒙古科技出版社；1984：259.
[2] 中国药典2010年版一部[ S ] .2010.
[3] 周羽琪.气相色谱法测定经不痛巴布膏中丁香酚的含量[ J ].中成药， 2002， 24（ 5） ： 347.
作者简介：
1.文秀云 女 汉族 1971.09生人， 通辽职业学院副教授，学历本科，药学专业，研究方向药剂。
2.王莹 女 汉族，1982.05生人，通辽市人，通辽职业学院讲师，研究方向：药物分析
项目基金：本文系内蒙古自治区高等学校科学研究项目课题《蒙药噶古拉—4滴丸成型工艺研究》。课题编号：NJZY12300。
[摘要] 目的：建立气相色谱法测定噶古拉-4滴丸中丁香酚含量的方法。方法：色谱柱为 （30m×0.25mm，0.25μm），检测器为氢离子火焰检测器，程序升温，进样口的温度为200℃，检测器温度为310℃，载气为氮气，流量为0.84mL.min-1，分流比为10：1，内标物为苯酚。结果：丁香酚在0.1-2.5μg范围内线性关系良好，平均加样回收率96.66%，RSD为1.42%（n=6）。结论：方法可靠，结果准确，为进一步提高噶古拉-4滴丸的质量控制方法打下了基础。
[关键词] 噶古拉-4；丁香酚；气相色谱法；含量测定。
嘎古拉-4汤是在蒙医临床上常用蒙成药之一， 由草果仁、木香、丁香和小茴香4味药材组成。 具有调节 “赫依” ，具有镇静、镇痛、健脾胃的功能[1]。根据文献资料报道嘎古拉-4中富含挥发油，其中丁香酚含量较高，可以作为丁香的质量控制指标，因此选择丁香酚作为噶古拉-4含量测定的指标成分具有实际意义和应用价值[2]。
1材料
1.1仪器
日本岛津GC2014C气相色谱仪（FID检测器），AOC-20i自动进样器，GC solution 色谱工作站；德国赛多利斯ALC-11C.4型电子天平；KQ500-DE 超声处理器。
1.2药品与试剂
丁香、木香、草果仁、小茴香等 4味蒙药材由北京同仁堂药店提供， 符合《内蒙古蒙成药标准》 1984年版有关规定； 嘎古拉-4滴丸按处方比例自制；丁香酚对照品（批号：110725-201213）和苯酚对照品（批号：110115-201112）均由中国药品生物制品检定所提供；所用试剂均为分析纯。
2 实验方法与结果
2.1色谱条件与系统适用性试验：
色谱柱：毛细管柱（30m×0.25mm，0.25μm）；FID检测器；程序升温： 初始温度为120℃ ，保持2min， 每分钟 17℃升至 200℃，保持4min，再每分钟 17℃升至 230℃， 保持 1 min。分流比为 10∶1。理论塔板数按丁香酚计应不低于2000，丁香酚和相邻峰的分离度应大于1.5[3]。
2.2对照品和供试品溶液的制备：
2.2.1对照品溶液：精密称取丁香酚对照品适量，置于10mL容量瓶中，无水乙醇溶解并稀释至刻度，作为储备液。取1mL至10mL容量瓶中，无水乙醇稀释至刻度，再取2mL至10mL容量瓶中，无水乙醇稀释至刻度，浓度为1.043 mg.mL-1。
另取内标物对照品适量，用无水乙醇配置成浓度为1.024mg.mL-1的内标溶液。
2.2.2供试品溶液：取噶古拉-4滴丸，研成粉末，精密称定1g，置于100mL的锥形瓶中，加无水乙醇20mL，密塞，称定质量，超声提取30min，取出，放至室温，再称定质量，用无水乙醇补足减失的质量，摇匀，静置，取上层溶液，用0.45μm微孔滤膜过滤，加入内标溶液 0.5 mL，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，得供试品溶液。
2.2.3阴性对照液的制备：取照本品的处方及制法制成的仅缺丁香的阴性对照品1.0g ，精密称定， 照供试品溶液的制备方法操作。
2.4 线性关系的考察
精密吸取丁香酚对照品溶液0.5 mL、1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5mL、6 mL，置10 mL 容量瓶中，精密加入内标溶液1mL ，用无水乙醇稀释至刻度，按上述条件和方法进样1μL测定峰面积。 以对照品与内标的浓度比（X）为横坐标，对照品与内标峰面积比（Y）为纵坐标绘制标准曲线，其回归方程为 Y=1. 445 6X+0. 0331 ， r =0. 999 6。结果表明，在上述色谱条件下丁香酚进样量在 0.0 ～ 2.13 mg/mL范围内与峰面积比呈良好的线性关系。
2.5精密度试验
精密吸取同一份对照品溶液1μL，注入气相色谱仪，重复进样6次，测定峰面积，计算丁香酚峰面积与内标峰面积的比值。结果测得丁香酚峰面积与内标峰面积比值的RSD为0.87%（n=6），表明仪器精密度试验符合有关规定。
2.6重复性试验
按照“2.2”项下的方法制备供试品溶液6份，各精密吸取1μL进样，按上述的色谱条件测定丁香酚峰面积与内标峰面积比值并计算含量。结果丁香酚平均含量为0.639mg.mL-1， RSD为 1.24%，表明本方法重复性良好。
2.7稳定性试验
精密吸取同一供试液1μL ， 注入气相色谱仪，按上述色谱条件在0、2、4、6、8、12、24小时测定峰面积进行稳定性考察，计算丁香酚峰面积与内标峰面积的比值。结果在24h内测定7次，数据稳定， RSD为 0.74%，表明供试品溶液在24h内稳定。
2.8回收率试验
采用加样回收法，精密称取同一批号已知含量的样品1g，共6份，分别精密加入丁香酚对照品溶液（1.043mg.mL-1）各1 mL，按照“2.2”项下的方法制备供试品溶液，制成回收率用供试品溶液，在上述色谱条件下测定样品中丁香酚的含量，计算加样回收率，结果平均回收率为96.66%，RSD为1.42%（n=6）。
2.9 样品含量测定结果
精密称取1g，取3份，按照“2.2”供试品溶液制备方法操作。按“2.1”色谱条件分析，进样量为1μL，测定每份样品中丁香酚的含量并计算，取平均值。结果见表2
4、讨论
嘎古拉-4汤是在蒙医临床上常用蒙成药之一，制剂中草果仁、木香、丁香和小茴香 4味药材均主要含有挥发性成分，故本实验以苯酚内标物， 采用GC内标法进行含量测定。运用气相色谱法测定蒙成药噶古拉-4滴丸中丁香酚含量的方法未见报道，本课题使用无水乙醇超声提取挥发性成分丁香酚，建立了测定噶古拉-4中丁香酚含量的气相色谱检测方法，本方法样品处理过程简单，色谱峰分离度良好，该法灵敏、稳定，为有效控制噶古拉-4的质量提供了新的依据。
参考文献：
[1] 内蒙古自治区卫生厅编.内蒙古成药标准[ S ] .赤峰：内蒙古科技出版社；1984：259.
[2] 中国药典2010年版一部[ S ] .2010.
[3] 周羽琪.气相色谱法测定经不痛巴布膏中丁香酚的含量[ J ].中成药， 2002， 24（ 5） ： 347.
作者简介：
1.文秀云 女 汉族 1971.09生人， 通辽职业学院副教授，学历本科，药学专业，研究方向药剂。
2.王莹 女 汉族，1982.05生人，通辽市人，通辽职业学院讲师，研究方向：药物分析
项目基金：本文系内蒙古自治区高等学校科学研究项目课题《蒙药噶古拉—4滴丸成型工艺研究》。课题编号：NJZY12300。