【摘 要】
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目的 检测微小RNA(miRNA,miR)-449a对神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH增殖的影响并探讨其作用机制.方法 人工设计合成miR-449a模拟物,构建上调miR-449a表达的细胞株SK-N-SH;实时定
【机 构】
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310014,杭州市儿童医院外科温州医科大学附属第二医院育英儿童医院小儿外科;
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目的 检测微小RNA(miRNA,miR)-449a对神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH增殖的影响并探讨其作用机制.方法 人工设计合成miR-449a模拟物,构建上调miR-449a表达的细胞株SK-N-SH;实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测转染后miR-449a的表达水平;转染48 h后采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞24、48、72 h的增殖,膜联蛋白V(Annexin-V)/碘化丙锭(PI)法检测细胞凋亡;利用生物信息学方法预测miR-449a的候选靶基因.结果 转染miR-449amimic的细胞中miR-449a的表达水平升高3.5倍;过表达miR-449a后细胞生长速度较对照组细胞明显减慢;过表达miR-449a后细胞凋亡明显增加,细胞总凋亡比例为(21.94±3.37)％,而对照组细胞的总凋亡比例为(11.01±3.51)％,两者差异有统计学意义(P＜0.05);通过靶基因预测软件分析,抗凋亡基因B细胞淋巴瘤/白血病2(bcl-2)是miR-449a的靶基因,过表达miR-449amimic后,内源性bcl-2蛋白的表达水平显著下降.结论 miR-449a可能通过调控bcl-2的转录水平抑制神经母细胞瘤细胞增殖,促进凋亡.
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