【摘 要】
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目的:建立简便、灵敏检测金黄色葡萄球菌肠毒素Ⅰ(staphylococcal enterotoxin Ⅰ,SEI)的双抗夹心酶联免疫吸附方法(double-antibody sandwich-enzyme linked immunosorbent
【机 构】
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西南民族大学生命科学与技术学院,四川成都,610041
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目的:建立简便、灵敏检测金黄色葡萄球菌肠毒素Ⅰ(staphylococcal enterotoxin Ⅰ,SEI)的双抗夹心酶联免疫吸附方法(double-antibody sandwich-enzyme linked immunosorbent assay,DAS-ELISA).方法:利用DAS-ELISA 检测程序确定单克隆抗体、抗血清、辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的羊抗兔IgG (IgG/HRP)的最佳稀释度,再通过检测不同包被缓冲液、封闭时间、抗原包被时间、IgG/HRP作用时间以及四甲基联苯胺(3,3,5,5-tetramethylbenzidine,TMB)显色时间条件下的OD450 nm值对实验条件进行优化,最后用灵敏度、批内变异、批间变异和加标回收率指标对方法进行评价.结果:抗SEI单克隆抗体的最佳稀释质量浓度为2.89 mg/L,抗SEI兔血清稀释度1:2000,酶标二抗稀释度1:6 000;1×磷酸缓冲盐溶液(pH 7.4)为最佳包被缓冲液;最佳封闭时间、抗原孵育时间、酶标二抗孵育时间和TMB显色时间分别为60、90、30 min和15 min.该方法的回归方程为y=0.040 9x+0.042 9,R2=0.993 3;灵敏度为0.5μg/L,精密度批内变异低于10％,批间变异低于15％,除巴氏杀菌牛乳外,对生理盐水、熟牦牛肉糜、大米饭和超高温瞬时灭菌牛乳回收率达90％以上.结论:本研究建立了一种快速检测SEI的双抗夹心方法.
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