【摘 要】
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目的建立C1酯酶抑制剂（C1esteraseinhibitor，C1-INH）抗原含量的双抗体夹心ELISA检测方法，验证后用于C1-INH纯化工艺摸索。方法用羊抗人C1-INH抗体作为捕获抗体，用过氧化物酶（HRP）标记的羊抗人C1-INH抗体作为检测抗体，进行棋盘滴定初步确定捕获抗体的工作浓度，用西门子血浆标准品进行系列稀释作为标准品经过两轮实验来确定拟合曲线和线性范围及检测抗体的工作浓度，用
【机 构】
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国药集团武汉血液制品有限公司科研开发部
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目的建立C1酯酶抑制剂（C1esteraseinhibitor，C1-INH）抗原含量的双抗体夹心ELISA检测方法，验证后用于C1-INH纯化工艺摸索。方法用羊抗人C1-INH抗体作为捕获抗体，用过氧化物酶（HRP）标记的羊抗人C1-INH抗体作为检测抗体，进行棋盘滴定初步确定捕获抗体的工作浓度，用西门子血浆标准品进行系列稀释作为标准品经过两轮实验来确定拟合曲线和线性范围及检测抗体的工作浓度，用血浆标准品标定电泳C1-INH标准品（电泳纯度＞92%），分析与血浆标准品的平行性来选择本方法最终使用的标准品，最终建立了C1-INH抗原含量的双抗体夹心ELISA检测方法。对此方法进行线性、准确度、精密度、加样回收率、电泳标准品稳定性的验证。将验证后的方法用于C1-INH纯化工艺的摸索及产品质量分析，并与特定蛋白检测仪的结果进行比较。结果捕获抗体浓度为400.000ng/mL，检测抗体浓度为400.000ng/mL，标准曲线采用四参数方程拟合，电泳标准品的浓度为0.895mg/mL，血浆标准品作为本方法标准品；标准曲线的线性范围为1.560～100.000ng/mL，各浓度标准品回收率在83.35%～112.19%，CV＜15.00%，R2≥0.990；不同浓度质控品检测结果的批内准确度在91.90%～113.14%，批间准确度在95.93%～106.10%，批内CV在1.00%～6.70%，批间CV在2.92%～6.54%。样品添加实验的回收率在93.37%～106.44%。-25℃冻存的电泳标准品可冻融3次使用，2～8℃可保存1周；加入等体积甘油后可以在-10～-20℃保存备用。结论本方法具有良好的线性、准确度和精密度。用该方法进行C1-INH的抗原含量检测可作为纯化工艺内部质量控制指标，主要用于工艺摸索中的低浓度C1-INH的抗原含量检测。
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