【摘 要】
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目的 观察牵拉力诱导下RPE细胞血管内皮生长因子(VEGF)的表达及两者之间的关系.设计 实验研究.研究对象 ARPE-19细胞株.方法 应用Flexcell-5000应力加载系统牵拉3D-RPE模型.
【机 构】
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100730,首都医科大学附属北京同仁医院北京同仁眼科中心北京市眼科研究所眼科学与视觉科学北京市重点实验室
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目的 观察牵拉力诱导下RPE细胞血管内皮生长因子(VEGF)的表达及两者之间的关系.设计 实验研究.研究对象 ARPE-19细胞株.方法 应用Flexcell-5000应力加载系统牵拉3D-RPE模型.根据不同大小牵拉力分为对照组(无牵拉力组)、A组(20％形变组)、B组(10％形变组)、C组(5％形变组).各组依照不同的时间点收取样本进行检测.应用实时荧光定量PCR检测各组不同时间点(0、24、48 h)VEGFA mRNA的表达情况,蛋白印迹法检测(0、24、48 h)VEGFA-165的表达以及ELISA方法检测(0、12、24、36、48 h)细胞上清液中VEGFA的分泌.同时,为了体外定量检测细胞VEGF的促新生血管形成能力,使用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)进行了体外成管实验(24、48h).主要指标 VEGFA mRNA相对表达量、VEGFA-165相对表达量、细胞上清液VEGFA分泌量、HUVEC成网数.结果 与对照组比较,A、B和C组在24 h(F=7.99,P=0.009)和48 h(F=75.09,P=0.000)的VEGFA mRNA表达均显著高于对照组,且B组VEGFA mRNA相对表达量在任意时间点均高于A组和C组(P均＜0.05).受牵拉力的三组的VEGFA-165蛋白相对表达量在24 h(F=51.62,P=0.000)和48 h(F=91.69,P=0.000)明显高于对照组.其中,B组VEGFA-165蛋白相对表达量在24 h(0.794±0.045)分别是A组的1.3倍(P=0.012)和C组的1.2倍(P=0.043),且在48 h(1.192±0.042)VEGFA-165蛋白相对表达量分别是A组的1.4倍(P=0.0001)和C组的1.3倍(P=0.0001).随着时间延长,在24 h(F=131.16,P=0.0001)、36h (F=66.56,P=0.0001)和48 h(F=605.19,P=0.0001)A、B和C组细胞上清液VEGFA浓度明显高于对照组.体外成管实验中,48 h受牵拉力各组成网数均显著高于对照组(F=13.13,P=0.002),而24 h仅B组成网数有明显升高(P=0.029).结论 牵拉力可诱导RPE细胞VEGF过表达,且具有时间效应和潜在的促新生血管形成的功能.
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