【摘 要】
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目的 观察运用RNA干扰技术沉默高半胱氨酸蛋白61(Cyr61)基因表达对人脑胶质瘤细胞及其裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法 构建针对Cyr61的小分子RNA干扰(siRNA)重组质粒载体pRNA
【机 构】
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430071,武汉大学中南医院神经外科
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目的 观察运用RNA干扰技术沉默高半胱氨酸蛋白61(Cyr61)基因表达对人脑胶质瘤细胞及其裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法 构建针对Cyr61的小分子RNA干扰(siRNA)重组质粒载体pRNAT-绿色荧光蛋白(GFP)-Cyr61,转染人脑胶质瘤U-87MG细胞;Western blot检测其对U-87MG细胞内源性Cyr61表达的影响;噻唑蓝(MTT)法观察U-87MG细胞体外增殖活性的变化;Western blot检测其对相关调控元件核因子(NF)-κB和相关转录因子丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)表达的影响;凝胶电泳迁移率实验(EMSA)分析Cyr61 siRNA转染U-87MG细胞后NF-KB的DNA结合情况;建立人脑胶质瘤裸鼠颅内移植瘤模型,免疫组织化学法观察通过RNA干扰敲除Cyr61基因后脑胶质瘤的微血管密度(MVD)及相关增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.结果 Cyr61 siRNA转染U-87MG细胞后在蛋白水平显著抑制Cyr61基因表达,其表达率最低为34.02％;能明显降低U-87MG细胞的增殖活性,抑制率最高达68.15％;NF-κB与MAPK蛋白的表达均明显降低,其表达率最低分别为34.65％、38.25％.其信号通路中相关调控元件NF-κB的DNA结合活性明显降低,抑制率最高为38.26％;种植Cyr61 siRNA转染U-87MG细胞的裸鼠胶质瘤MVD明显下降,抑制率达24.20％;PCNA蛋白含量也明显降低.结论 Cyr61 siRNA可抑制Cyr61在人脑胶质瘤U-87MG细胞及裸鼠胶质瘤中的表达,降低其信号通路中相关调控元件和转录因子的活性,并抑制人脑胶质瘤的生长.
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