旋毛虫Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂的表达及免疫相关性研究

来源 :中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jyj910
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  寄生虫分泌的蛋白酶抑制剂是寄生虫与宿主间相互作用的重要分子.本研究根据GenBank上旋毛虫Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂(KaSPI)基因编码序列设计特异性引物,进行RT-PCR扩增,将所获PCR产物克隆至pEASY-T1载体后转入克隆感受态Tans5α,经过PCR和EcoR Ⅰ、Xho Ⅰ双酶切鉴定后进行测序.将所获目的基因与载体pET-30a(+)相连接,然后将鉴定正确的重组表达质粒pET-TsKaSPI转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,利用IPTG诱导蛋白表达.SDS-PAGE电泳分析所得融合蛋白约为38KDa与预测蛋白理论值大小相符,主要以包涵体形式存在.对纯化后的重组蛋白进行Western Blot鉴定,结果显示该蛋白可以被感染旋毛虫小鼠阳性血清所识别,具有良好的抗原性.将纯化的重组蛋白腹腔注射到小鼠体内检测其对小鼠的免疫保护性,结果表明,旋毛虫肌幼虫减虫率为38.3%.通过间接ELISA法检测血清抗体水平,结果显示重组蛋白免疫小鼠血清的抗重组蛋白抗体IgG总体水平显著高于感染对照组和佐剂组.
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