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目的:探讨Decorin对TGFFβ1诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK-2)转分化的影响;观察Deeorin对TGFβ1诱导的HK-2细胞I、Ⅲ型胶原表达的影响。
方法:将体外培养的HK-2细胞分为6组:A.阴性对照组;B.10ng/ml TGFβ1组:C.10ne/mlDecorin组;D.100ng/ml Decorin组;E.10ng/ml TGFβ1+10ng/mlDecodn组;F.10ng/mlTGFβ1+100ng/ml Decorin组。培养48h后,倒置显微镜下观察各组细胞的形态学变化。应用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)检测HK-2细胞内α-平滑肌肌动蛋白(α—SMA)、波形蛋白、角蛋白、I、Ⅲ型胶原mRNA水平的表达;应用蛋白印迹技术(western-blot)和细胞免疫组化方法观察不同浓度的Decorin对HK-2细胞I、Ⅲ型胶原蛋白水平表达变化的影响。
结果:(1)A组、C组和D组细胞形态无明显变化,大部分细胞仍为椭圆形;A、C、D三组中,α-SMA、波形蛋白、角蛋白mRNA表达无显著性差异(P>0.05)。B组HK-2细胞形态发生明显变化,大部分细胞拉长呈梭形,波形蛋白、α-SMA mRNA表达明显提高,角蛋白mRNA表达减少,与A组相比较有显著性差异(P<0.05)。E组和F组,梭形样细胞明显减少,尤其是F组梭形样细胞减少更明显,波形蛋白、α-SMA mRNA表达有所下降,角蛋白mRNA表达呈上升趋势,与B组相比较有显著性差异(P<0.05),其中E组和F组两组间亦有显著性差异(P<0.05)。(2)B组与A相比较,HK-2细胞I、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白质的表达量明显增多;加入不同浓度的Decorin后,I、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白质的表达与单独TGFβ1组相比有不同程度的减少,且E组和F组相比较,两组间差异显著(P<0.05)。
结论:(1)TGFβ1能明显诱导人肾小管上皮细胞发生转分化;Decorin对TGFβ1诱导的人肾小管上皮细胞转分化具有抑制作用。(2)TGFβ1能促进人肾小管上皮细胞合成I、Ⅲ型胶原。(3)Decorin能抑制TGFI-1刺激引起的人肾小管上皮I、Ⅲ型胶原合成增加。