【摘 要】
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目的探讨肠道粘膜上皮细胞特异性呈递肠道细菌抗原并诱发局部和全身性免疫和病理反应,制备 AS 的精确动物模型—HLA—B27转基因鼠,研究 AS 病变的发病机理。方法 1．显微注射用 B27、2-icroglobulin（2-m）基因的制备；2．大、小鼠受精卵的显微注射；3．鼠尾基因组 DNA 的提取； 4．PCR 检测；5．Southern blotting 检测。结果 1．通过显微注射技术,将上
【机 构】
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全国中西医结合强直性脊柱炎专题研讨会论文汇编
【出 处】
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目的探讨肠道粘膜上皮细胞特异性呈递肠道细菌抗原并诱发局部和全身性免疫和病理反应,制备 AS 的精确动物模型—HLA—B27转基因鼠,研究 AS 病变的发病机理。方法 1．显微注射用 B27、2-icroglobulin（2-m）基因的制备；2．大、小鼠受精卵的显微注射；3．鼠尾基因组 DNA 的提取； 4．PCR 检测；5．Southern blotting 检测。结果 1．通过显微注射技术,将上述制备的 HLA-B27/2-m 等体积混合后注入小鼠受精卵的雄原核内,共注射1370枚受精卵,将注射后存活的1050枚卵移植到58只假孕母鼠输卵管内,其中7只难产死亡,产仔97只。2．通过显微注射技术,将上述制备的 HLA-B27 注入大鼠受精卵的雄原核内,共注射187枚受精卵,将注射后存活的142枚卵移植到5只假孕母鼠输卵管内,产仔27只,存活22只。3．对97只转基因小仔鼠及22只转基因大仔鼠进行检测,结果27只小仔鼠和7只大仔鼠为 PCR 阳性。4．分别取27份 PCR 阳性小鼠的基因组和7份 PCR 阳性大鼠的基因组进行杂交检测,结果有8份小鼠样品和3份大鼠样品为 Southern blotting 阳性。结论本实验显微注射小鼠受精卵的存活率为76．64％（1050/1370）,幼仔出生率为9．90％（104/1050）,整合率为7．69％ （8/104）；显微注射大鼠受精卵的存活率为75．93％（142/187）,幼仔出生率为19．01（27/42）,整合率为11．11％（3/27）,与国内外报道相一致。本研究成功建立的 HLA-B27转基因鼠,为研究肠道细菌感染 HLA-B27对肠粘膜 MHCⅡ类抗原表达的影像及对 AS 患者 IEC 表达细胞间粘附分子的影响、从细胞和分子水平研究影响 IEC 呈递细菌缺原等各种因素的探讨奠定了基础,为进一步明确 AS 的发病机制及寻找早期控制这一顽疾的治疗手段提供了初步的理论依据。
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