【摘 要】
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目的 NUSAP1(the nucleolar and spindle-associated protein 1)是一种细胞微管结合蛋白,是保证细胞周期正常进行的重要调控分子.近年来,越来越多的研究证实NUSAP1 在多种肿瘤中的表达异常升高,但其在胃癌中的生物学功能及其调控机制尚未见报道.方法 采用TCGA 及Oncomine 等数据库分析NUSAP1 在胃癌组织中的表达情况.运用免疫组织化学(
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目的 NUSAP1(the nucleolar and spindle-associated protein 1)是一种细胞微管结合蛋白,是保证细胞周期正常进行的重要调控分子.近年来,越来越多的研究证实NUSAP1 在多种肿瘤中的表达异常升高,但其在胃癌中的生物学功能及其调控机制尚未见报道.方法 采用TCGA 及Oncomine 等数据库分析NUSAP1 在胃癌组织中的表达情况.运用免疫组织化学(IHC)检测NUSAP1 在胃癌组织中的表达,并验证其与患者临床病理特征、预后的相关性.采用一系列细胞功能学实验检测调控NUSAP1 的表达对胃癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力的影响.利用TCGA 结合GSEA 分析寻找可能受NUSAP1 调控的关键分子及信号通路.进一步采用免疫共沉淀实验(Co-IP)、免疫荧光、放线菌酮(CHX)、Western blotting 及实时定量PCR 等实验阐明NUSAP1 促胃癌恶性进展的分子调控机制.本项目还将在体内裸鼠荷瘤模型中验证NUSAP1 促胃癌细胞发生发展的生物学功能及调控机制.结果 TCGA 及Oncomine 等数据库分析发现NUSAP1 mRNA 在大多数胃癌组织中表达升高.免疫组织化学(IHC)的结果 示：与正常胃粘膜组织相比,NUSAP1 在胃癌组织中表达明显升高(59/104,56.73％),且其高表达与患者的临床分期差、出现转移及总生存时间(OS)短密切相关.Westernblotting 实验结果 示NUSAP1 在大多数胃癌细胞系中的表达显著升高,干扰NUSAP1 能显著抑制胃癌细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力.TCGA 结合GSEA 分析结果 示：在胃癌中NUSAP1 的表达与Hippo 通路下游重要靶基因CTGF 和CYR61 的表达呈正相关关系,提示Hippo 通路是受NUSAP1调控的潜在下游信号通路.进一步的机制研究发现干扰NUSAP1 能抑制YAP 及Hippo 下游靶基因的蛋白表达,但LATS1/2 的表达未见明显异常.免疫荧光实验结果 发现NUSAP1 能和YAP 蛋白共定位于细胞核,Co-IP 实验和CHX 实验示证实NUSAP1 能和YAP 蛋白相互结合并增加其蛋白稳定性进而调控Hippo 信号通路活性.体内裸鼠实验证实干扰NUSAP1 能显著抑制瘤体的生长能力.结论 NUSAP1 能通过增加YAP 蛋白稳定性调控Hippo 信号通路促进胃癌细胞恶性进展.
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