【摘 要】
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鸭疫里默氏杆菌是引起鸭传染性浆膜炎的主要病原,给世界各国养鸭业造成了巨大损失.目前,用于鸭疫里默氏杆菌基因操作技术并不完善,延缓了对其致病机制的深入研究.在成功构建用于鸭疫里默氏杆菌基因回补穿梭质粒的基础上,本研究发现鸭疫里默氏杆菌RpsL基因突变后会对链霉素产生抗性,而在突变株中表达野生型的RpsL,突变株会变的对链霉素重新敏感.基于此现象,本试验利用RpsL作为反向筛选基因成功建立了鸭疫里默氏
【机 构】
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四川农业大学动物医学院预防兽医研究所,成都四川;四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心,成都四川;动物疫病与人类健康四川省重点实验室,成都四川
【出 处】
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第五届全国禽病分子生物技术青年工作者会议
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鸭疫里默氏杆菌是引起鸭传染性浆膜炎的主要病原,给世界各国养鸭业造成了巨大损失.目前,用于鸭疫里默氏杆菌基因操作技术并不完善,延缓了对其致病机制的深入研究.在成功构建用于鸭疫里默氏杆菌基因回补穿梭质粒的基础上,本研究发现鸭疫里默氏杆菌RpsL基因突变后会对链霉素产生抗性,而在突变株中表达野生型的RpsL,突变株会变的对链霉素重新敏感.基于此现象,本试验利用RpsL作为反向筛选基因成功建立了鸭疫里默氏杆菌的无痕缺失方法.利用此方法,成功在鸭疫里默氏杆菌缺失掉了TonB依赖性的受体基因RA0C_1050.RA0C_1050基因缺失株明显损伤了鸭疫里默氏杆菌从血红蛋白获取血红素的能力,表明RA0C_1050是一种TonB依赖性的血红素受体.进一步,通过构建RA40C_1050与tonB双缺失株、回补株及血红素利用试验证明RA0C_1050依赖于TonB2发挥作用.荧光定量试验表明RA0C_1050基因的转录受铁离子以及血红素的调控.本研究所建立的无痕缺失的方法为在鸭疫里默氏杆菌同时缺失多个基因提供了方便,并可以避免基因缺失所引起的极效应,进一步丰富了鸭疫里默氏杆菌基因操作方法.
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