【摘 要】
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Caldicellulosiruptor saccharolyticus纤维二糖差向异构酶(CsCE)是目前乳果糖酶法生产中最高效的酶,但游离酶在工业生产中存在诸多不足.本文旨在建立一种快速、简单和经
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Caldicellulosiruptor saccharolyticus纤维二糖差向异构酶(CsCE)是目前乳果糖酶法生产中最高效的酶,但游离酶在工业生产中存在诸多不足.本文旨在建立一种快速、简单和经济的CsCE固定化方法,直接采用壳聚糖(CS)和三聚磷酸钠(TPP)絮凝结合戊二醛的交联作用固定化CsCE细胞.冻干的透化细胞直接作为CsCE的酶源,考察影响固定化的各因素,结果表明：在pH 5.0,CS浓度0.02％ (w/v),CS∶TPP=5∶3的条件下絮凝,絮凝产物用0.25％ (v/v)戊二醛交联,最终酶活回收率在90％以上.固定化酶的理化性质与游离酶相比,最适温度降为75℃,60℃下固定化酶的半衰期由游离酶的24 h提高到60 h.最适pH向弱酸性方向偏移0.5变为7.0,在pH 4-11范围内酶活稳定,4℃下保藏120 d后,仍保持初始酶活的98％.游离酶和固定化酶的Km值分别为(69.03±1.42) mmol/L和(117.84 ±9.63) mmol/L.固定化酶应用于转化乳糖生产乳果糖,在Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液中经2h反应,乳果糖浓度为394.7g/L,转化率达到65.6％.本实验首次提供了一种高性能和低成本的固定化产CsCE细胞的方法,为工业上酶法连续化生产乳果糖提供有益的参考和借鉴.
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