【摘 要】
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目的 研究原发性不育和/或输精管缺如患病群体CFTR基因单倍体Poly-T,TG-repeats和M470V的分布以及相关致病突变,并与正常人进行比较,为CFTR的临床基因诊断提供参考.材料与方法 39例患者均为男性,年龄23～42岁,临床诊断为原发性不育和/或输精管缺如.收集患者的外周血DNA标本,利用PCR-测序法对CFTR基因进行检测,并对其中三例行家系分析,统计所有患者CFTR基因8号内含
【机 构】
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中南大学生殖与干细胞工程研究所 中信湘雅生殖与遗传专科医院
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目的 研究原发性不育和/或输精管缺如患病群体CFTR基因单倍体Poly-T,TG-repeats和M470V的分布以及相关致病突变,并与正常人进行比较,为CFTR的临床基因诊断提供参考.材料与方法 39例患者均为男性,年龄23～42岁,临床诊断为原发性不育和/或输精管缺如.收集患者的外周血DNA标本,利用PCR-测序法对CFTR基因进行检测,并对其中三例行家系分析,统计所有患者CFTR基因8号内含子(TG) mTn、10号外显子M470V等位基因以及其他相关致病突变的分布情况,并与文献报道的健康人多态分布数据进行比较.结果1、 (TG)mTn等位基因频率分布： T765.4％； T5 34.6％,TG-repeats单倍体(TG) 1243.6％； (TG)11 34.6％； (TG)13 21.8％. (TG)11T7 34.6％； (TG)12T7 29.5％； (TG)13T5 19.2％；(TG)12T5 14.1％；(TG)13T7 2.6％.2、10号外显子M470V分布： V470 52.4％,M470 47.6％,MV基因型41.5％；W基因型31.7％；MM基因型26.8％.3、三例家系分析结果：家系1患者基因型为(TG) 13T5-MM；两位正常生育的兄弟基因型均为：(TG) 12T7/(TG) 11T7-W；家系2患者存在纯合错义突变c.4118 G＞A (p.Ser 1373Asn),为新发现突变.其母亲携带该杂合错义突变,弟弟正常生育,不存在该突变.针对该位点对117个正常人进行检测,均未见该突变.家系3患者基因型为(TG) 11T7/(TG) 12T5,同时22号外显子存在c.3963_3964 ins TTGGG杂合突变.父亲基因型为(TG) 12T7/(TG)1 1T7,c.3963_ 3964ins TTGGG杂合突变；其弟患有无精症,基因型与患者相同；4、其他已记载突变：c.1394 C＞T (HGMD登记号CM063897)杂合突变1例；c.1667.A＞G (CM920985)杂合突变1例；c.2909G＞A (CE952227)杂合突变1例；c.3062 C＞T (CM972957)杂合突变1例.结论 1、本研究中原发性不育和/或输精管缺如患者CFTR Poly-T,TG-repeats及M470V的分布情况与宋莹、黄沁等人报道的长春、南京等地健康人群数据相比： (1) M470V的等位基因频率相近,该位点单独存在与疾病无明显相关性.(2)患者群中T5等位基因频率高于30％；健康人群T5等位基因频率小于1％.提示T5单倍体与疾病有较大相关性(3) (TG)13在健康人中未见报道,患者中(TG)13单倍体比例占21.8％,且与470M同时出现.可见(TG) 13极有可能为致病单倍体,且与470M存在高度连锁不平衡.2、三例家系分析支持T5等位基因及(TG) 13等位基因为致病性等位基因.3、c.4118 G＞A、c.3963_3964 ins TTGGG均为新发现的致病突变,与原发性不育及先天性输精管缺如有较大的相关性.4、除8号内含子外,已记载的杂合错义突变集中于10、11、16、17号外显子,提示CFTR基因诊断可以9、10、11、16、17号外显子及其邻近内含子序列为热点区域优先测序检测,以节约成本,提高诊断效率.
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