【摘 要】
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细胞凋亡是机体生命活动过程中一种基本的生物学现象,也在多种疾病发生过程中发挥重要功能.有多种蛋白参与调控细胞凋亡,其中一类含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶Caspase
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会
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细胞凋亡是机体生命活动过程中一种基本的生物学现象,也在多种疾病发生过程中发挥重要功能.有多种蛋白参与调控细胞凋亡,其中一类含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶Caspases是凋亡的关键因子.弓形虫没有Caspases,但存在结构和功能与Caspases类似的Metacaspases,后者在植物、真菌及原生生物中具有调控细胞周期和参与细胞凋亡等功能.已有研究发现在体外可通过凋亡诱导剂诱导弓形虫凋亡,虫体表现为典型的细胞凋亡现象.本研究构建了TgMCA基因敲除株及过表达株,通过基因调控株与野生株的比较研究,揭示MCA在弓形虫中的功能.通过生物信息学分析发现弓形虫Metacaspase(TgMCA)具有依赖于半胱氨酸和组氨酸的p20结构功能域,预示着其可能参与虫体凋亡.间接免疫荧光(IFA)结果显示,MCA定位于胞内虫体的细胞质；当虫体处于胞外环境中,其向虫体细胞核聚集,说明其可能进入细胞核发挥功能.当虫体处于胞外缓冲液4小时,通过细胞入侵实验发现基因缺失株虫体活力强于野生株,同时经TUNEL法检测,基因缺失株虫体凋亡率显著降低；过表达株对胞外环境更敏感,凋亡率升高,以上结果证实TgMCA在弓形虫凋亡过程中发挥重要作用.TgMCA基因缺失不影响虫体发育繁殖,但过表达株增殖能力下降,对小鼠的毒力也相应降低；通过IFA观察过表达株处于内二分裂的虫体数量显著多于野生株,这可能由于过表达MCA调控虫体细胞分裂周期造成的.
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