【摘 要】
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目的 家族性慢性良性天疱疮(Hailey-Hailey Disease,HHD)是一种少见的常染色体显性遗传性大疱性皮肤病,70％的患者有家族史,多于青春期以后发病.HHD典型的临床特征为皮肤皱褶部位反复出现瘙痒性水疱、糜烂.出汗、摩擦、皮肤感染等外界因素可诱发该病或病情加重.该病是由ATP2C1基因突变所致,ATP2C1基因定位于3q21-24,全长107.46kb,包含28个外显子,编码919
【机 构】
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中国医科大学医学基因组学教研室 教育部医学细胞生物学重点实验室 沈阳 110001 沈阳市第七人民
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目的 家族性慢性良性天疱疮(Hailey-Hailey Disease,HHD)是一种少见的常染色体显性遗传性大疱性皮肤病,70％的患者有家族史,多于青春期以后发病.HHD典型的临床特征为皮肤皱褶部位反复出现瘙痒性水疱、糜烂.出汗、摩擦、皮肤感染等外界因素可诱发该病或病情加重.该病是由ATP2C1基因突变所致,ATP2C1基因定位于3q21-24,全长107.46kb,包含28个外显子,编码919个氨基酸.ATP2C1基因突变,遍布于整个基因,没有热点区域,其中以错义突变和无义突变为主.方法 设计PCR引物,扩增覆盖ATP2C1基因外显子及外显子-内含子交界区并直接测序分析,利用PCR结合限制性内切酶片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism, RFLP)对100名正常人进行该位点突变分析.构建mini-pC AS-A TP2 C1野生及突变型载体,转染HeLa细胞后提取总RNA,RT-PCR及测序分析mRNA的剪切改变并从患者全血中提取RNA进行验证.结果 家系中先证者携带ATP2C1基因杂合错义突变c.1413G＞C,(p.Gln 470 His),该突变导致ATP2C1蛋白470位谷氨酰胺变成组氨酸.检索人类基因突变数据库(http：//www.hgmd.cf.ac.uk/ac/all.php)未发现上述突变的报道.PCR-RFLP结果显示,100名正常人均未检测到相同变异.由于该突变位点位于第15外显子最后一位碱基,推测其可能影响剪切位点的识别.转染mini-pCAS-ATP2C1野生和突变型载体后结果显示mini-pCAS-ATP2C1野生型载体和空载均能够进行正常剪切,而mini-pCAS-A TP2 C1突变型载体发生外显子16跳跃.再次对患者外周血中RNA进行RT-PCR结果证实患者体内存在缺少外显子16的突变型转录本,并未激活隐蔽性剪切位点,与mini-pCAS载体预测的结果一致.16外显子的缺失将会导致ATP2C1蛋白的整码突变,从437位甲硫氨酸到471位谷氨酰胺将会缺失.结论 1.ATP2C1基因e.1413G＞C,(p.Gln 470His)为该HHD家系致病突变,丰富了ATP2 C1基因突变数据库,也为该HHD家系的遗传咨询和产前诊断提供实验依据.2.剪切位点附近的碱基改变可能影响剪切位点的识别,从而导致基因的转录异常.3.在RNA样本获得困难的情况下,体外minipCAS载体能够有效的预测突变对剪切的影响,为进一步分析突变基因所产生的功能变化提供依据.
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