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山楂是一种重要的前花青素(procyanidin,简称PC)的潜在资源。针对目前有关山楂前花青素的研究现状,本文开发了两种用于评价山楂原料、提取物及其制品中前花青素含量的分析方法,并采用这两种方法对山楂原料中前花青素的稳定性进行了评价和研究。 分光光度法采用钼酸铵为显色剂,以表儿茶素为对照,在400nm测定样品中总前花青素的含量,按分析步骤操作,样品溶液中前花青素的浓度在30~170μg/mL范围与吸光度呈良好的线性相关性,相关系数r=0.9999。在70~84μg/mL的加标水平下,平均回收率为105.5%,重复分析操作(5次)测定结果的相对标准偏差RSD=0.34%,方法的最低检出限为2.1μg/mL。 采用国产高效液相色谱仪建立了一种快速分析山楂主要活性成分的等度高效液相色谱(HPLC)法。色谱柱:使用Hypersil BDS C18分析柱(4.6mm id×250mm,5μm);温度:室温;流动相:甲醇/乙睛/水=21/2/77,含500μL/L的甲酸,流速:0.8mL/min;紫外俭测器波长:280nm;进样量:10μL。对山楂原料中的主要活性成分表儿茶素、前花青素B2,前花青素C1以及绿原酸等成分进行了分离和检测,各成分间有良好的分离,分析时间在20min以内,采用外标峰面积法定量,重复分析几种成分的相对标准偏差在0.36%~1.52%之间,最低检出限为0.144~0.309ng,线性范围在0.01~10.0μg,回归方程的相关系数r在0.9998~0.9999之间。这两种方法均具有操作简便、快速准确的优点。钼酸铵分光光度法适用于对样品中前花青素总含量的分析和评价,HPLC法适合于对各主要成分含量进行分析和监控。两种方法相互补充,可作为对山楂原料、提取物以及药物制剂中的前花青素进行质量控制及检测的分析手段。 采用分光光度法和HPLC法对山楂(Crataegus pinnatifida Bge.var.major N.E.Br.)鲜果、山楂粉、山楂片中前花青素的含量进行了分析,结果表明干制品中总前花青素的表观含量为鲜果中的4~5倍,但几种主要活性成分的含量只相当于鲜果的2倍左右,表明干制过程造成了低聚前花青素(OPC)的可观损失。 对21种存放条件下果实中前花青素的稳定性进行了研究,结果表明,在贮存过程中几种主要成分以及前花青素总含量的变化符合一级化学反应的动力学模型。贮存温度对前花青素的降解反应有重要影响,60℃条件下,山楂片、山楂粉在密闭与敞口存放下各种成分的半衰期(T1/2)只有1~9天,在室温(20℃)条件下,这些成分的T1/2分别在75~1003天之间。前花青素总含量的分析结果可以反应这一趋势,在20,30,40,50,60℃下敞口存放的山楂片中,前花青素总量的T1/2分别为430,274,188,97,37天,说明室温干燥条件是山楂原料进行长期保存的可选方式之一。实验进行了山楂片与山楂粉、密闭与敞口存放的对比,综合分析结果表明,本次实验中这些因素之间没有表现明显的差异。低温(0℃)鲜果贮存试验的结果表明,经159天的存放,果实中的低聚前花青素和总前花青素的含量变化不大,好果率等指标也均符合正常标准,这表明低温贮存是解决原料