啤酒酵母多糖的纯化工艺及结构鉴定

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多糖具有多种生理活性,如抗肿瘤,抗感染,增强机体免疫活性等而为人们关注。本论文通过脱蛋白、脱脂、离子交换柱层析和凝胶柱层析对酵母多糖粗品进行纯化处理,并通过化学分析和仪器分析方法检测多糖的结构,获取酵母多糖的结构信息。其主要研究内容如下:①酵母多糖的脱蛋白方法的研究:采用Sevag法、Sevag法与酶法结合的方法,比较分析得出最佳脱除酵母多糖蛋白质的试验。试验结果表明:Sevag法后多糖损失较严重,且脱蛋白效果不如酶法结合Sevag法。酶法结合Sevag法的最佳工艺条件为:水解温度60℃,pH7. 0,加样量3:1,通过该方法脱蛋白后样品多糖含量为72.12%,蛋白质浓度为6.86mg/mL。②酵母多糖的脱脂方法的研究:以提取物中的酵母多糖含量为测定指标,考察溶剂石油醚与乙醚、回流时间及料液比三个因素对脂肪脱除的影响。试验结果表明当乙醚:石油醚比例为1:3、提取温度为50℃、提取时间为5h效果最佳。经脱脂处理后,多糖含量可达74.06%。③酵母多糖的柱层析:采用DEAE-52离子交换层析和Sephadex G200凝胶柱层析对脱蛋白和脂肪后的酵母多糖进行进一步分离纯化研究。经离子交换层析和凝胶层析分离纯化后,得到多糖精制品YPS-Ⅰ。④YPS I分子量的测定:采用GPC/RI/MALLS联机对YPS I分子量进行测定,YPS I为相对均一多糖,分子量分布相对集中,重均分子量MW为2.083×10~5。⑤YPS I结构的分析研究:通过摸索单糖衍生条件和酵母多糖水解试验,得出最适衍生条件:温度80℃、时间20min、衍生剂加入量170μL;酵母多糖的最佳水解条件为:三氟乙酸浓度3.0mol/L、水解时间2h。HPLC检测YPS I单糖组成,确定其由葡萄糖聚合而成。对YPS I用IR检测,图谱显示样品具有多糖的特征吸收峰,YPS I为含β-糖苷键的六元葡萄吡喃糖。通过对YPS I高碘酸氧化和Smith降解,得出YPS I为以1→3键型为主链,并含有部分1→6键型的支链的葡聚糖。
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