第一部分 肝细胞肝癌中COX-2、PPAR-γ的相关表达 序言 环氧合酶(COXs)是花生四烯酸(AA)合成前列腺素(PGs)的限速酶。迄今已知的COXs有二种亚型，即COX-1和COX-2。COX—1在人体消化系统、泌尿系统、中枢神经系统等很多的组织内组成性表达，对于维持自身的机体功能具有重要的作用。而COX-2属诱导型酶，在正常组织中无表达，当细胞受到各种刺激因素包括生长因子、细胞因子、炎性介质、促癌剂等作用时，COX-2的表达快速上调。研究表明，COX-2不仅是启动炎症反应的关键酶，而且还可通过促进细胞增殖，抑制凋亡，促进肿瘤新生血管形成等机制参与多种肿瘤的发生和发展过程。进一步阐明COX-2与肿瘤的关系，有利于揭示某些环境和饮食因素促进肿瘤发生和发展的机制，并为寻找有效的预防和治疗开辟新途径。 然而有研究结果显示，COX-2本身并不能作为信号传导激酶而起作用，其在肿瘤细胞中最可能的信号传导途径是通过其下游的各种前列腺素等产物结合相应的受体来完成其调节功能。其中，具有结合内源性前列腺素特性的过氧化物酶体增殖因子活化受体(PPAR)途径可能是重要途径之一。其中过氧化物酶体增殖因子活化受体—γ(PPAR—γ)与肿瘤的关系较为密切。 PPAR—γ是一类核激素受体，受其配体激活后可启动核内靶基因的转录，调节脂类的糖代谢。近年来研究发现PPAR—γ位于机体多种信号传导途径的交叉点，可诱导多种肿瘤细胞分化。Sato等报道PPAR—γ蛋白在高、中、低分化胃腺癌中以及伴肠化生的胃黏膜中均有表达，Elstner等报道，高水平的PPAR—γ蛋白表达可能是乳腺癌细胞区别正常乳腺细胞的标志之一。COX－2是PPAR—Y的天然配体15—d—PGJZ合成过程中的重要限速酶，这些提示我们PPAR－Y可能作为COX－2的下游基因参予肿瘤的形成。迄今为止关于COX－2和PPAR－Y在肝癌中的相互作用机制未见文献报导，有待于进一步深入研究。 本课题通过对COX－2、PPAR－Y在肝细胞肝癌中的表达研究，旨在探讨COX－2、PPAR－Y在肝细胞肝癌发生、发展中的作用，并试图探究COX－2和PPAR－Y两者在肝细胞肝癌中的相互调控机制。 方 法 a．收集标本 收集我院29例肝细胞肝癌标本，6例肝硬化组织标本和6例组织学正常的肝脏标本。 b．RT－PCR检测COX－2、PPAR－Y。RNA在肝细胞肝癌中的表达水平。 c．Western blotting检测 COX－2、PPAR－Y蛋白在肝细胞肝癌中的表达水平。 结 果 1．COX上和PPAR1 mRNA在肝细胞肝癌中的表达 采用半定量RTPCR法，观察COX－2和PPAR－y mRNA在29例肝细胞肝癌标本（包括癌组织和癌旁scm、10c。组织）、6例肝硬化标本和6例组织学正常的肝脏标本中的表达情况。结果显示COX－2。RNA在正常肝脏组织、肝硬化组织和肝细胞肝癌中都有不同程度的表达，并且各组比较无显著性差异（P＞0．05）。COX－2 mRNA的表达水平与肿瘤的大小、转移情况、分化程度、肿瘤部位等无相关性。 而PPAR－Y mRNA在6例肝硬化标本、6例组织学正常的肝脏标本中都没有表达，仅在肝细胞肝癌标本中表达，并且癌组织的表达明显强于癌旁组织（P＜0．05）。 2．COX毛和 PPARry蛋白在肝细胞肝癌中的表达 采用Western—blot法检测COX－2在正常肝脏组织和肝细胞肝癌中的蛋白表达水平，结果显示COX－2蛋白在正常肝脏组织中弱表达，而在肝细胞肝癌标本中强表达，癌组织COX－2蛋白的表达水平高于癌旁组织。PPAR1蛋白表达检测尚未完成。 结 论 COX－2可能在HCC的发病早期扮演了重要的角色，而PPARY可能通过COX—2参予HCC的形成过程。 3 第二部分 选择性COXZ抑制剂Etodolac对肝癌细胞的 增殖抑制和凋亡诱导作用研究 序 言 肝细胞肝癌约占人类恶性肿瘤的4％，每年至少有315000名患者死于肝细胞肝癌。肝细胞肝癌预后普遍很差，即使进行手术治疗，术后 5年生存率也只有 25％一 29％。目前仍无有效的化学治疗和预防手段，特别是缺乏行之有效的化学预防和治疗靶位。 近来研究表明非笛体消炎药（NSAIDs）如阿司匹林等可抑制结肠癌细胞的生长，并且对临床结肠癌也有预防作用。环氧合酶（Coxs）是催化花生四烯酸生成前列腺素的关键酶，也正是NSAIDS的特异性的作用靶点。人类目前至少有两种环氧合酶：COX—l、COX—2。COX—l在人体消化系统、泌尿系统、中枢神经系统等很多的组织内组成性表达，对于维持机体自身的生理功能具有重要的意义。而COX—2则在机体炎症和肿瘤等病理状态下诱导性表达。COX—2与细胞的增殖分化，血管生成等都有密切关系。非选择性NSAIDS同时抑制COX—l和COX—2，使得保护性的前列腺素和促炎症的前列