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结直肠癌是最常见的消化道肿瘤之一,据统计,每年癌症导致的死亡病例中,约有10%是结直肠癌。目前手术结合放化疗是治疗结直肠癌最常见的手段。奥沙利铂是结直肠癌化疗的主要药物之一,但是部分患者在治疗过程中逐渐对奥沙利铂敏感性下降,甚至对其它与奥沙利铂结构和功能不相似的化疗药物也产生交叉耐药,导致化疗失败,肿瘤复发或转移,严重限制了患者的生存期。P-gp由MDR1基因编码,作为ABC转运蛋白超家族成员,P-gp能够发挥药物泵作用,通过将化疗药物转运出肿瘤细胞外,减少化疗药物在肿瘤细胞内的积累,从而降低化疗药物对肿瘤细胞的毒性作用。P-gp表达上调是肿瘤细胞产生耐药性的标志之一,研究表明肿瘤细胞中P-gp表达量与耐药性呈正相关。肿瘤细胞促凋亡途径的失活及抑凋亡途径的激活,也与肿瘤耐药关系密切。PI3K/AKT信号通路在肿瘤耐药的发生发展中发挥重要的作用,研究表明,PI3K/AKT信号通路的抑制剂具有逆转肿瘤耐药性的作用,PI3K的亚基p110β和p85α可以作为潜在靶标,逆转P-gp和BCRP（乳腺癌耐药蛋白）介导的肿瘤耐药。牡荆素是一种天然的黄酮类化合物,它来源广泛,可从多种药用及食用植物中提取。牡荆素具有良好的抗肿瘤作用,近年来有研究表明,牡荆素在逆转肿瘤细胞耐药方面也起到一定作用。目的:本研究旨在探讨牡荆素是否通过PI3K/AKT信号通路,逆转结直肠癌奥沙利铂耐药。方法:1.体外培养结直肠癌敏感细胞株HCT8及耐药细胞株HCT8/L,CCK8法分别检测不同浓度牡荆素（50、100、200、400μmol/L）对两株细胞生存率的影响。2.体外培养耐药细胞HCT8/L及敏感细胞HCT8,收取蛋白质,通过Western Blot比较两株细胞P-gp表达,凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax、Bcl-2的表达,以及PI3K/AKT通路相关蛋白p85α、AKT、p-AKT的表达。3.将HCT8/L细胞分为四组,对照组:HCT8/L细胞,实验组1:HCT8/L+牡荆素（50μmol/L）;实验组2:HCT8/L+牡荆素（100μmol/L）;实验组3:HCT8/L+牡荆素（200μmol/L）。Hoechst33258检测牡荆素对HCT8/L细胞凋亡的影响;流式细胞术检测牡荆素对HCT8/L细胞凋亡和细胞周期的影响;Western Blot检测各组P-gp,凋亡相关Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax、Bcl-2的表达,以及PI3K/AKT通路相关蛋白p85α、AKT、p-AKT的表达。4.体外培养HCT8/L细胞,将细胞分为四组,对照组:HCT8/L细胞;实验组1:HCT8/L+740Y-P（PI3K激动剂）;实验组2:HCT8/L+牡荆素;实验组3:HCT8/L+牡荆素+740Y-P。Western Blot检测各组中P-gp,凋亡相关Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax、Bcl-2的表达,以及PI3K/AKT通路相关蛋白p85α、AKT、p-AKT的表达。以P＜0.05为差异有统计学意义。结果:1.CCK8检测牡荆素对HCT8及HCT8/L细胞的细胞生存率的影响CCK8检测结果显示,随着牡荆素浓度（50、100、200、400μmol/L）的提高,HCT8及HCT8/L细胞,细胞存活率下降,与未处理组相比较,差异具有统计学意义（P＜0.05）。2.Western Blot检测结直肠癌HCT8及HCT8/L细胞中,P-gp,凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax、Bcl-2及PI3K/AKT通路相关蛋白p85α、AKT、p-AKT表达Western Blot检测结果显示,与HCT8细胞相比较,HCT8/L细胞P-gp表达量较高,差异具有统计学意义（P＜0.05）;凋亡相关Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9、Bax表达相对较低,Bcl-2表达较高,差异具有统计学意义（P＜0.05）;PI3K/AKT通路相关蛋白p85α、p-AKT表达较高,差异具有统计学意义（P＜0.05）。AKT表达没有显著变化,差异无统计学意义（P＞0.05）。3.牡荆素（50、100、200μmol/L）对HCT8/L细胞凋亡的影响Hoechst33258染色结果及流式细胞术检测结果显示,HCT8/L细胞凋亡率随着牡荆素浓度提高而上升,与对照组相比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。4.不同浓度牡荆素（50、100、200μmol/L）对HCT8/L细胞周期的影响流式细胞术检测结果显示,与对照组相比,牡荆素组HCT8/L细胞周期G1期显著延长,差异具有统计学意义（P＜0.05）。5.牡荆素（50、100、200μmol/L）对HCT8/L细胞P-gp及凋亡相关蛋白表达的影响Western Blot结果显示,与对照组相比较,不同浓度牡荆素组HCT8/L细胞P-gp表达下降,差异具有统计学意义（P＜0.05）;凋亡相关Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax蛋白表达上调,Bcl-2表达下调,差异具有统计学意义（P＜0.05）。6.牡荆素（50、100、200μmol/L）处理HCT8/L细胞,对细胞PI3K/AKT信号通路的影响。Western Blot结果显示,牡荆素处理后的HCT8/L细胞p85α、p-AKT表达下调,差异具有统计学意义（P＜0.05）,AKT表达差异无统计学意义（P＞0.05）。7.Western Blot检测PI3K激活剂740Y-P激活PI3K/AKT信号通路后,牡荆素对通路蛋白的影响将HCT8/L细胞分为四组,对照组:HCT8/L细胞;实验组1:HCT8/L+740Y-P（PI3K激动剂）;实验组2:HCT8/L+牡荆素;实验组3:HCT8/L+牡荆素+740Y-P。实验组1（740Y-P处理）与对照组比较p85α、p-AKT表达上调,差异具有统计学意义（P＜0.05）,AKT表达差异不具有统计学意义（P＞0.05）。实验组3（740Y-P+牡荆素联合作用）与实验组2相比较p85α、p-AKT表达上调,差异具有统计学意义（P＜0.05）,AKT表达无明显变化,差异无统计学意义（P＞0.05）。8.牡荆素通过PI3K/AKT信号通路调控HCT8/L细胞P-gp及凋亡相关蛋白表达实验组1（740Y-P处理）与对照组比较,P-gp表达上调,差异具有统计学意义（P＜0.05）;凋亡相关Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax蛋白表达下调,Bcl-2表达上调,差异具有统计学意义（P＜0.05）。实验组3（HCT8/L+740Y-P+牡荆素）与实验组2相比较,P-gp表达上调,差异具有统计学意义（P＜0.05）;凋亡相关Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax表达下调,Bcl-2表达上调,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:1.牡荆素能够下调P-gp表达并抑制PI3K/AKT信号通路活性。2.牡荆素通过PI3K/AKT信号通路,诱导耐药细胞凋亡,下调P-gp表达,逆转结直肠癌奥沙利铂耐药。