体细胞重编程过程中,细胞多能性的鉴定依据大多参考早期胚胎中内细胞团基因的表达模式和规律,其中EpCAM可作为鉴定诱导多能干细胞是否具备多能性的表面标记物之一。目前研究表明,EpCAM可在多种细胞中表达并具备特有的裂解模式,然而其在早期胚胎中的表达及裂解模式至今仍未见报道。在本研究中,我们构建了EpCAM荧光报告载体系统,对EpCAM在早期胚胎中的表达及裂解模式进行了初步探究,并利用双荧光素酶报告系统探究了不同多能转录因子对EpCAM启动子活性的影响。目的:通过观察EpCAM荧光报告载体系统在猪早期胚胎中的定位来确定猪EpCAM在早期胚胎中的表达及裂解模式,通过双荧光素酶报告系统探究对猪EpCAM启动子活性有影响的多能因子,为优化猪i PSCs诱导体系和鉴定方法提供参考。方法:通过分子克隆技术构建EpCAM荧光报告载体系统,利用293T细胞对其进行慢病毒包装,将产生的慢病毒粒子感染PEF、PK-15细胞,验证EpCAM荧光报告系统功能的有效性。通过显微注射将目的质粒导入卵母细胞,观察荧光表达探究EpCAM在早期胚胎的表达裂解模式,并通过免疫荧光法探究EpCAM在克隆囊胚的表达。以基因合成技术获得人源与猪源的多能基因,通过双荧光素酶基因报告系统检测EpCAM在293T细胞中启动子的活性及各种多能基因对EpCAM启动子活性的影响。结果:酶切鉴定及DNA测序结果显示成功建立了EpCAM荧光报告载体系统。293T细胞转染试验结果显示EpCAM在PK-15细胞及PEF表达强度上存在差异。慢病毒感染试验表明EpCAM在PK-15细胞上表达在PEF细胞上不表达。显微注射试验表明了EpCAM在2细胞、4细胞、8细胞均表达且2细胞、4细胞可观察到部分膜定位特征。胚胎免疫荧光试验结果表明EpCAM在克隆胚胎囊胚中表达且具有膜定位特征。双荧光素酶报告系统试验表明在293T细胞中EpCAM启动子活性显著高于p GL3-Basic,同时POU5F1、SOX2对EpCAM启动子活性有抑制作用;明确了JDP2、NR5A2、SALL4B、MYCL及1号染色体上的NANOG对EpCAM启动子活性的促进作用。结论:（1）建立的EpCAM荧光报告载体系统具有功能上的有效性。（2）EpCAM在2细胞、4细胞、8细胞、囊胚表达。（3）EpCAM在2细胞、4细胞、囊胚中具有膜定位特征。（4）EpCAM在2细胞、4细胞被水解为胞外结构域Ep EX及胞内结构域Ep ICD,且水解的Ep ICD包围于细胞核。（5）明确了多种多能因子对EpCAM启动子活性的影响。