三阴性乳腺癌（Triple negative breast cancer,TNBC）是一类雌激素受体（Estrogen receptor,ER）、孕激素受体（Progesterone receptor,PR）以及人类表皮生长因子受体2（Human epidermal growth factor receptor,HER-2）的表达均为阴性的乳腺癌亚型,该类患者约占乳腺癌患者总数的20%-25%,具有易复发和转移、预后差、易发生耐药性等特点。Roscovitine是一种广谱细胞周期蛋白依赖性激酶（Cyclin-dependent protein kinase,CDK）抑制剂,对包括TNBC在内的多种癌症均表现出良好的抗肿瘤作用,但其在临床实验中的结果并不理想。为了寻找选择性更强、毒性更低、抗肿瘤活性总体更强的新型Roscovitine衍生物,本研究从一系列新型Roscovitine衍生物中筛选出了抑制多种肿瘤细胞（包括TNBC）增殖最有效的化合物G-4,并进一步评价了其在TNBC中的抗肿瘤活性。本研究分别从体外水平和体内水平评价了G-4的抗肿瘤活性,进而分别在细胞、蛋白、酶活和基因水平挖掘并分析其潜在分子靶点。在体外水平的活性评价中,证明了G-4不仅可以有效地抑制TNBC细胞的增殖和细胞集落的形成,还可以抑制TNBC细胞的迁移和HUVEC细胞的血管形成。体内水平的活性评价显示G-4在原位移植瘤Balb/C小鼠/裸鼠模型中能有效地阻碍瘤块的增长,并促进肿瘤细胞的凋亡;与此同时,G-4可以抑制肿瘤细胞的远端转移。对G-4的抗TNBC机制进行初步筛查时,发现其对4T1-GFP和MDA-MB-231细胞的形态有较大影响,并可引起TNBC细胞周期S期的阻滞,并刺激TNBC细胞内ROS含量的增加,造成线粒体膜电位减弱,最终促进TNBC细胞凋亡。G-4还可下调MDA-MB-231细胞和裸鼠肿瘤中S期相关蛋白Cyclin A的表达,降低线粒体凋亡途径相关蛋白Bcl-xl、Bcl-2、caspase 3的表达,提高Bax、Cytochrome C、caspase 9和p53的表达,降低EMT通路相关蛋白SNAIL和Vimentin的表达,降低p-38、p-JNK1/2、p-Erk、p-AKT和p-EGFR的表达。不仅如此,G-4对CLK1、CLK2、CLK4、DYRK1A和CK1ε激酶的选择性也显著提高。转录组测序筛选得到的720个重合表达的显著差异基因,并通过DNA复制、细胞周期和错配修复等通路参与细胞过程、生物调节和代谢过程等生物过程。综上所述,本研究证实了化合物G-4在TNBC中的肿瘤抑制效应;并发现其通过线粒体凋亡通路、MAPK、EMT以及引起细胞周期S期阻滞等途径促进TNBC细胞的凋亡和周期阻滞、抑制TNBC细胞的增殖和转移,从而发挥抗肿瘤效应;同时,G-4还对CLK1、CLK2、CLK4、DYRK1A和CK1ε多重激酶活性的抑制作用密切相关;测序结果提示G-4可能是通过DNA复制、细胞周期和错配修复等途径抑制TNBC细胞的发生过程,但仍需进行进一步的功能实验验证。