【摘 要】
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目的:探讨EIF4A3/MMP11对结直肠癌侵袭、迁移和上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的影响。方法:通过生物信息学预测MMP11在结直肠癌中的表达水平及MMP11 m RNA能和EIF4A3蛋白结合的可能性。从成都医学院第二附属医院核工业四一六医院获取结直肠癌患者癌及癌旁组织样本各20例,q RT-PCR检测组织中MMP11的表达情况。q
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目的:探讨EIF4A3/MMP11对结直肠癌侵袭、迁移和上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的影响。方法:通过生物信息学预测MMP11在结直肠癌中的表达水平及MMP11 m RNA能和EIF4A3蛋白结合的可能性。从成都医学院第二附属医院核工业四一六医院获取结直肠癌患者癌及癌旁组织样本各20例,q RT-PCR检测组织中MMP11的表达情况。q RT-PCR和Western blot分析正常人结肠上皮细胞和结直肠癌细胞中MMP11 m RNA和蛋白的表达水平,并选择表达水平最高的结直肠癌细胞进行下一步研究。在结直肠癌细胞HCT15和DLD1中,通过RIP实验检测EIF4A3/MMP11之间的相互作用。将si-EIF4A3及其阴性对照分别转染到HCT15和DLD1细胞中,24小时后添加放线菌素D,在0h、3h、6h、9h、12h后收集细胞,提取细胞总RNA以检测各组细胞中MMP11 m RNA的半衰期。分别在HCT15细胞中转染si-EIF4A3、si-NC、p EGFP1-EIF4A3与p EGFP1-NC,将其分成EIF4A3抑制组及其对照组、EIF4A3过表达组及其对照组后通过Western blot分别检测各组MMP11蛋白表达水平。为进一步探讨MMP11、EIF4A3在结直肠癌（CRC）细胞转移过程中的影响,我们选择HCT15细胞作为研究对象,将其分别转染si-EIF4A3、si-NC、si-EIF4A3+p EGFP1-MMP11及si-EIF4A3+p EGFP1-NC,将其分组为EIF4A3抑制组及其对照组、EIF4A3抑制+MMP11过表达组及其对照组,后通过Western blot分别检测各组MMP11蛋白表达情况;Transwell与划痕实验,检测各组细胞侵袭与迁移能力变化情况。最后,通过Western blot检测各组细胞中的E-cadherin、Vimentin与N-cadherin等EMT相关蛋白表达的变化。结果:MMP11是结直肠癌患者TOP25高表达基因之一,相较于正常人结肠癌旁组织和上皮细胞,在结直肠癌组织和细胞中表达升高（均P＜0.001）。其中以HCT15细胞中表达水平最高,其次是DLD1细胞。RNA结合蛋白免疫沉淀（RIP）实验证实EIF4A3能与MMP11相互作用;RT-q PCR试验证实降低EIF4A3的表达后,MMP11的半衰期缩短（P＜0.05）。Western blot实验结果来看,抑制EIF4A3表达降低MMP11蛋白的表达水平,而过表达EIF4A3则能升高MMP11蛋白表达水平;Transwell和划痕实验显示,干扰EIF4A3表达抑制结直肠癌细胞HCT15的侵袭、迁移（均P＜0.05）,Western blot实验表明干扰EIF4A3表达后,与对照组相比,E-cadherin蛋白表达增加,Vimentin、N-cadherin蛋白表达降低,而抑制EIF4A3表达同时过表达MMP11则HCT15细胞的迁移与侵袭能力得到一定程度的恢复,E-cadherin蛋白表达降低,Vimentin、N-cadherin蛋白表达略有升高,说明过表达MMP11能在一定程度上逆转降低EIF4A3表达所引起的对HCT15细胞的抑制作用。结论:1.MMP11在结直肠癌组织和细胞中表达均明显升高,其中以结肠癌HCT15细胞中的表达最为明显。2.EIF4A3能和MMP11相互作用,抑制EIF4A3的表达会降低MMP11的表达,过表达EIF4A3,则能升高MMP11的蛋白表达水平。从结果来看,EIF4A3能与MMP11相互结合,并增强MMP11 m RNA稳定性。3.干扰EIF4A3表达能抑制结直肠癌细胞的侵袭、转移和上皮间质转化,而同时过表达MMP11时可以逆转上述作用,说明EIF4A3/MMP11/N-cadherin/vimentin轴能促进结直肠癌细胞增殖和上皮间质转化,促进结直肠癌侵袭迁移和EMT进程。综上所述,靶向EIF4A3/MMP11的治疗可抑制结直肠癌的进展,具有广阔的临床应用前景。
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