【摘 要】
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目的:通过观察鼠李糖乳杆菌及姜黄素干预MAFLD模型大鼠的肝脏病理变化、肝指数、肝功能、肝脏脂肪含量、血清炎性因子、肝组织Toll样受体4（TLR4）信号通路相关蛋白及肠道菌群的变化,探讨其对MAFLD的影响及可能的作用机制。方法:（1）40只SPF级SD雄性大鼠适应性喂养1周后随机分为正常对照组（MCS）、模型对照组（MCD）、鼠李糖乳杆菌干预组（LGG）、姜黄素干预组（CUR）和鼠李糖乳杆菌联
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目的:通过观察鼠李糖乳杆菌及姜黄素干预MAFLD模型大鼠的肝脏病理变化、肝指数、肝功能、肝脏脂肪含量、血清炎性因子、肝组织Toll样受体4（TLR4）信号通路相关蛋白及肠道菌群的变化,探讨其对MAFLD的影响及可能的作用机制。方法:（1）40只SPF级SD雄性大鼠适应性喂养1周后随机分为正常对照组（MCS）、模型对照组（MCD）、鼠李糖乳杆菌干预组（LGG）、姜黄素干预组（CUR）和鼠李糖乳杆菌联合姜黄素干预组（LGG+CUR）,每组8只。分别给予鼠李糖乳杆菌、姜黄素及鼠李糖乳杆菌联合姜黄素溶液灌胃。（2）4周末处死大鼠,比较5组大鼠肝脏病理变化及肝指数;（3）检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）和肝脏脂肪含量（TG、TC）。（4）用双抗体夹心酶联免疫吸附（ELISA）实验检测血清内毒素（LPS）、白介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平;（5）RT-PCR法检测大鼠肝组织中TLR4、核因子-κBp65（NF-κBp65）和髓样分化因子88（MyD88）基因的表达水平;（6）用免疫印迹法检测大鼠肝组织中TLR4、NF-κBp65和MyD88蛋白的表达水平;（7）收集大鼠粪便,用16s r RNA基因测序方法检测肠道菌群的变化。结果:（1）与MCS组相比,MCD组大鼠的一般情况更差,肝组织出现大面积脂肪变性和脂质浸润,血清转氨酶和炎性因子水平明显升高,证实蛋氨酸胆碱缺乏饮食喂养4周成功建立了代谢相关脂肪性肝病大鼠模型。（2）大鼠肝指数:MCD组大鼠肝指数明显高于MCS组,与MCD组比较,各干预组大鼠肝指数均显著降低,其中LGG+CUR组下降最为显著（P＜0.01）。（3）血清转氨酶和肝脏脂肪含量:MCD组大鼠血清ALT、AST和肝脏TG、TC显著高于MCS组（P＜0.01）,干预组与MCD组大鼠比较血清ALT、AST和肝脏TG、TC均显著降低（P＜0.01）,其中以LGG+CUR组降低最为显著。（4）血清炎性因子:MCD组血清LPS、IL-6、TNF-α水平显著高于MCS组,与MCD组比较,各干预组均可明显降低血清LPS、IL-6、TNF-α水平（P＜0.01）,其中LGG+CUR组下降最为显著。（5）TLR4、NF-κBp65和MyD88的表达水平:MCD组大鼠肝组织TLR4、NF-κBp65和MyD88的基因及蛋白表达均显著高于MCS组,各干预组TLR4、NF-κBp65和MyD88的基因和蛋白表达均显著下降（P＜0.01）,其中LGG+CUR组下降更明显。（6）肠道菌群变化:MCD组肠道菌群丰富度及多样性明显低于MCS组,各干预组肠道菌群丰富度及多样性均好于MCD组（P＜0.01）;与MCS组相比,MCD组厚壁菌门丰度下降,拟杆菌门和变形菌门丰度增加;与MCD组相比,各干预组厚壁菌门丰度较升高,拟杆菌门和变形菌门丰度降低,其中以LGG组变化最为显著（P＜0.01）。结论:肠道微生态失衡是MAFLD发生发展的重要途径,经鼠李糖乳杆菌和姜黄素干预后,MAFLD大鼠肠道菌群的多样性和丰富度均有所改善,拟杆菌门和变形菌门可能是MAFLD的致病菌。鼠李糖乳杆菌和姜黄素均能明显改善MAFLD大鼠肝脏的脂质沉积、肝功能、血脂水平,减少炎性因子的表达,其机制可能与调节TLR4信号通路,降低肝脏TLR4、MyD88和NF-κB的表达相关。
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