【摘 要】
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目的:通过观察鼠李糖乳杆菌及姜黄素干预MAFLD模型大鼠的肝脏病理变化、肝指数、肝功能、肝脏脂肪含量、血清炎性因子、肝组织Toll样受体4(TLR4)信号通路相关蛋白及肠道菌群的变化,探讨其对MAFLD的影响及可能的作用机制。方法:(1)40只SPF级SD雄性大鼠适应性喂养1周后随机分为正常对照组(MCS)、模型对照组(MCD)、鼠李糖乳杆菌干预组(LGG)、姜黄素干预组(CUR)和鼠李糖乳杆菌联
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目的:通过观察鼠李糖乳杆菌及姜黄素干预MAFLD模型大鼠的肝脏病理变化、肝指数、肝功能、肝脏脂肪含量、血清炎性因子、肝组织Toll样受体4(TLR4)信号通路相关蛋白及肠道菌群的变化,探讨其对MAFLD的影响及可能的作用机制。方法:(1)40只SPF级SD雄性大鼠适应性喂养1周后随机分为正常对照组(MCS)、模型对照组(MCD)、鼠李糖乳杆菌干预组(LGG)、姜黄素干预组(CUR)和鼠李糖乳杆菌联合姜黄素干预组(LGG+CUR),每组8只。分别给予鼠李糖乳杆菌、姜黄素及鼠李糖乳杆菌联合姜黄素溶液灌胃。(2)4周末处死大鼠,比较5组大鼠肝脏病理变化及肝指数;(3)检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)和肝脏脂肪含量(TG、TC)。(4)用双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)实验检测血清内毒素(LPS)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;(5)RT-PCR法检测大鼠肝组织中TLR4、核因子-κBp65(NF-κBp65)和髓样分化因子88(MyD88)基因的表达水平;(6)用免疫印迹法检测大鼠肝组织中TLR4、NF-κBp65和MyD88蛋白的表达水平;(7)收集大鼠粪便,用16s r RNA基因测序方法检测肠道菌群的变化。结果:(1)与MCS组相比,MCD组大鼠的一般情况更差,肝组织出现大面积脂肪变性和脂质浸润,血清转氨酶和炎性因子水平明显升高,证实蛋氨酸胆碱缺乏饮食喂养4周成功建立了代谢相关脂肪性肝病大鼠模型。(2)大鼠肝指数:MCD组大鼠肝指数明显高于MCS组,与MCD组比较,各干预组大鼠肝指数均显著降低,其中LGG+CUR组下降最为显著(P<0.01)。(3)血清转氨酶和肝脏脂肪含量:MCD组大鼠血清ALT、AST和肝脏TG、TC显著高于MCS组(P<0.01),干预组与MCD组大鼠比较血清ALT、AST和肝脏TG、TC均显著降低(P<0.01),其中以LGG+CUR组降低最为显著。(4)血清炎性因子:MCD组血清LPS、IL-6、TNF-α水平显著高于MCS组,与MCD组比较,各干预组均可明显降低血清LPS、IL-6、TNF-α水平(P<0.01),其中LGG+CUR组下降最为显著。(5)TLR4、NF-κBp65和MyD88的表达水平:MCD组大鼠肝组织TLR4、NF-κBp65和MyD88的基因及蛋白表达均显著高于MCS组,各干预组TLR4、NF-κBp65和MyD88的基因和蛋白表达均显著下降(P<0.01),其中LGG+CUR组下降更明显。(6)肠道菌群变化:MCD组肠道菌群丰富度及多样性明显低于MCS组,各干预组肠道菌群丰富度及多样性均好于MCD组(P<0.01);与MCS组相比,MCD组厚壁菌门丰度下降,拟杆菌门和变形菌门丰度增加;与MCD组相比,各干预组厚壁菌门丰度较升高,拟杆菌门和变形菌门丰度降低,其中以LGG组变化最为显著(P<0.01)。结论:肠道微生态失衡是MAFLD发生发展的重要途径,经鼠李糖乳杆菌和姜黄素干预后,MAFLD大鼠肠道菌群的多样性和丰富度均有所改善,拟杆菌门和变形菌门可能是MAFLD的致病菌。鼠李糖乳杆菌和姜黄素均能明显改善MAFLD大鼠肝脏的脂质沉积、肝功能、血脂水平,减少炎性因子的表达,其机制可能与调节TLR4信号通路,降低肝脏TLR4、MyD88和NF-κB的表达相关。
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