【摘 要】
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目的:牙龈卟啉单胞菌（P.gingivalis）是牙周炎的重要病原体。Rho A/ROCK1通路通过在炎症、内皮细胞功能、血管平滑肌收缩、增殖和迁移等方面发挥重要作用,与心血管疾病的病理过程密切相关。我们前期研究已证实P.gingivalis可通过调控Drp1诱导内皮细胞线粒体功能障碍,这可能是P.gingivalis引起内皮功能障碍的机制。但P.gingivalis调节Drp1的信号通路尚不清楚
【基金项目】
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国家自然科学基金（NO.81970943）；
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目的:牙龈卟啉单胞菌（P.gingivalis）是牙周炎的重要病原体。Rho A/ROCK1通路通过在炎症、内皮细胞功能、血管平滑肌收缩、增殖和迁移等方面发挥重要作用,与心血管疾病的病理过程密切相关。我们前期研究已证实P.gingivalis可通过调控Drp1诱导内皮细胞线粒体功能障碍,这可能是P.gingivalis引起内皮功能障碍的机制。但P.gingivalis调节Drp1的信号通路尚不清楚。本研究拟进一步探索Rho A/ROCK1通路在P.gingivalis感染引起线粒体功能障碍中的作用。方法:用P.gingivalis感染EA.hy926细胞。采用蛋白印迹法和pull-down法评估Rho A和ROCK1的蛋白质表达和活化。透射电镜、Mito-Tracker Red CMXRos染色共聚焦显微镜观察线粒体超微结构及形态。Calcein AM染色、流式细胞术、RTPCR和化学发光法测量线粒体功能,即线粒体通透性转换孔（mitochondrial permeability transition pore,m PTP）的开放程度、线粒体DNA（mitochondrial DNA,mt DNA）拷贝数和ATP含量。蛋白印迹法和免疫荧光染色检测Drp1的表达及分布。利用Rho A和ROCK1抑制剂预处理细胞来阐明Rho A/ROCK1通路在线粒体功能障碍中的作用。结果:1.P.gingivalis感染内皮细胞导致Rho A活化及Rho A/ROCK1通路的激活。2.P.gingivalis感染导致m PTP开放增加、mt DNA拷贝数减少、ATP含量降低。3.Rho A和ROCK1抑制剂阻断了P.gingivalis感染导致的线粒体片段化。4.Rho A和ROCK1抑制剂预处理后未见P.gingivalis感染导致的线粒体功能障碍。5.Rho A和ROCK1抑制剂具有抵消P.gingivalis诱导的p-Drp1（Ser616）表达增加和线粒体易位的作用。结论:1.P.gingivalis感染激活内皮细胞Rho A/ROCK1通路。2.Rho A/ROCK1通路参与P.gingivalis诱导的线粒体功能障碍。3.Rho A/ROCK1通路可以调控Drp1的磷酸化和线粒体易位。
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