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目的:从中药浙白术中提取分离得到双白术内酯,探讨双白术内酯抑制ACh E的作用机制,为进一步开发双白术内酯成为抗AD药物提供理论基础。方法:1双白术内酯的提取分离:采用乙酸乙酯浸渍提取生浙白术,用色谱分离技术对其化学成进行分离,通过1H-NMR,13C-NMR技术进行化合物分子结构确证。分离得到一系列化合物包括双白术内酯。2分子对接研究:运用MOE分子对接软件将双白术内酯分子与ACh E蛋白进行分子对接,明确它们相互之间的分子作用位点。3双白术内酯抑制ACh E活性研究:采用Ellman法评价双白术内酯对ACh E抑制活性,得到不同浓度双白术内酯对ACh E的抑制率,绘制双白术内酯对ACh E抑制率的量效曲线图,得到一个拟合的曲线方程,求出IC50值。4双白术内酯抑制ACh E的表达研究:将ACh E-S基因与GSK-3β基因转染到敲除了GSK-3β的MEF细胞与293T细胞中,加入不同浓度的双白术内酯后培养细胞24 h后,通过蛋白质免疫印迹技术观察双白术内酯在MEF细胞和293T细胞中对ACh E的表达水平的影响,探讨其作用机制。结果:1从白术的乙酸乙酯提取物中初步分离经结构鉴定得到了10个化合物,分别为白术内酯I(3000 mg),白术内酯II(800 mg),白术内酯III(7000 mg),双白术内酯(480 mg),蒲公英萜醇乙酸酯(240mg),杜松脑(180 mg),二十八烷酸(50mg),β-谷甾醇(380 mg),十七烷酸(600 mg),7-ɑ-羟基-β-谷甾醇(9.8 mg)。2分子对接研究表明双白术内酯可以与ACh E蛋白的PAS活性部位中的Trp279通过H-π(3.31?)的作用结合;与CAS活性部位中的Trp84形成H-π(3.88?)的作用,RMSD=1.14?,表明双白术内酯与ACh E稳定结合,且分子对接体系稳定性良好。3双白术内酯可以有效的抑制ACh E水解ACh的活性,一定浓度范围内双白术内酯对ACh E抑制率有一定的量效关系,构建了一个量效曲线方程:y=-0.33x2+9.14x+6.99(R2=0.9874),IC50值为14.1685μM。4双白术内酯可以下调MEF细胞中的ACh E的表达,也可以下调293T细胞中的ACh E的表达,且具有剂量依赖性。结论:采用乙酸乙酯浸渍提取浙白术,分离得到了双白术内酯,并且其产率明显高于文献报道的产率。双白术内酯抑制ACh E的作用机制是通过与ACh E结合抑制其活性,还可能通过抑制了GSK3β活性来下调ACh E的表达水平。