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为探究黑水虻（Hermetia illucens）幼虫粉（black soldier fly larva meal,BSF）、小球藻粉（Chlorella sorokiniana meal,CSM）和乙醇梭菌蛋白（Clostridium autoethanogenum protein,CAP）三种蛋白源替代饲料中鱼粉对珍珠龙胆石斑鱼（Epinephelus fuscoguttatus♀×E.lanceolatus♂）生长、健康及肌肉品质的影响,本研究设计了三个养殖实验。其中每个实验的对照组饲料（FM）鱼粉水平均为50%,在对照组基础上以不同水平的蛋白源梯度替代鱼粉蛋白并配平必需氨基酸制成等氮等脂的饲料,饲养珍珠龙胆石斑鱼8周。具体结果如下:1.以BSF替代FM组中10%、20%、30%的鱼粉蛋白质,分别命名为BSF10、BSF20、BSF30。实验结果表明,随饲料BSF替代水平的增加,珍珠龙胆石斑鱼的增重率、特定增长率显著降低,饲料系数、日摄食率、肝体比、脏体比显著增加（P＜0.05）。随饲料BSF替代水平增加,各组血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、超氧化物歧化酶（SOD）活性显著上升,谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性显著下降（P＜0.05）。随着BSF替代水平的增加,石斑鱼肝脏中健康细胞数量减少、病变及炎症细胞及脂滴数量增加,SOD、GSH-Px活性显著下降,丙二醛（MDA）含量显著升高（P＜0.05）。BSF30组石斑鱼肝脏乙酰辅酶A羧化酶（acc）、6-磷酸葡糖酸脱氢酶（g6pd）、激素敏感性脂肪酶（hsl）相对表达量相比对照组显著上调（P＜0.05）。饲料中BSF的替代显著降低了BSF30组石斑鱼后肠道肌层厚度（P＜0.05）,也增加了微绒毛间距,BSF30组石斑鱼后肠几丁质酶活性和胰蛋白酶活性上升。BSF替代组石斑鱼后肠的（nf-κb1）核因子-κb1、转录因子c-Rel（c-rel）和白细胞介素10（il-10）mRNA水平相对于对照组显著上调,对照组的myd88 mRNA水平显著低于BSF30组、toll样受体22（tlr22）mRNA水平显著低于BSF20和BSF30组。随着饲料BSF水平的提高,肠道菌群的多样性指数和丰富度指数均呈下降趋势,厚壁菌门（Firmicutes）等6门、贺氏菌属（Escherichia-Shigella）等4属的微生物相对丰度受到了显著影响（P＜0.05）。对BSF20、FM组石斑鱼背肌代谢组分析表明,BSF的替代使十二碳酸等27种差异代谢物上调,N6-乙酰基-L-赖氨酸等13种下调;脂肪酸合成通路等4种代谢通路上调,赖氨酸降解通路等6种下调。综上所述,用BSF替代饲料中10-30%鱼粉可以增加珍珠龙胆石斑鱼的摄食率和肠道几丁质酶、胰蛋白酶的活性,但对珍珠龙胆石斑鱼的生长性能、饲料效率和肝脏、肠道健康有负面影响,也会降低肠道菌群的总丰度,并改变肌肉品质。因此,BSF在珍珠龙胆石斑鱼配合饲料中的鱼粉替代水平不宜超过10%。2.以CSM替代FM组中15%、30%、45%的鱼粉蛋白质,分别命名为CSM15、CSM30、CSM45。实验结果表明,三CSM替代组石斑鱼增重率和特定生长率相近,都显著低于对照组（P＜0.05）。CSM45组摄食率显著低于对照组（P＜0.05）,各组间饲料系数无显著差异。血清方面,三CSM替代组TP含量都显著低于对照组（P＜0.05）。随饲料CSM替代量的增加,酸性磷酸酶（ACP）活性呈下降趋势,碱性磷酸酶（AKP）活性呈上升趋势,ALT、AST、SOD活性显著上升（P＜0.05）,GSH-Px活性随替代水平增加显著下降（P＜0.05）。肝脏方面,随着CSM替代水平的增加,健康细胞数减少,高替代组的肝细胞出现了磨砂状和球状变形肿大;MDA含量显著上升,总抗氧化能力（T-AOC）、GSH-Px、SOD的活性则显著下降（P＜0.05）。肠道方面,后肠肌层厚度、皱襞长度随饲料CSM替代水平增加显著下降,脂肪酶和胰蛋白酶活性活性显著增加（P＜0.05）。CSM30组myd88、trl22、nf-κb1、il-10表达水平显著高与对照组,CSM15组nf-κb1的表达也显著高与对照组（P＜0.05）。综上所述,CSM替代鱼粉会显著降低珍珠龙胆石斑鱼的生长并对健康产生负面影响。三CSM替代组间生长无显著性差异,但更高水平的替代会进一步降低石斑鱼的抗氧化能力与非特异性免疫能力。CSM的替代也使石斑鱼肠道和肝脏产生了炎症,但对肌肉形态和无显著影响。小球藻粉在珍珠龙胆石斑鱼配合饲料中的鱼粉替代水平不宜超过15%。3.以CAP替代FM组中15%、30%、45%、60%的鱼粉蛋白质,分别命名为CAP15、CAP30、CAP45、CAP60。实验结果表明,CAP替代饲料中15-45%的鱼粉对石斑鱼增重率、特定生长率无显著影响,而当鱼粉替代量达到60%时,增重率、特定生长率显著低于FM组和CAP15组（P＜0.05）。各组间饲料系数无显著性差异。CAP30组日摄食率和存活率组最高,显著高于CAP60组（P＜0.05）。血清方面,随饲料CAP替代量的增加,总胆固醇含量显著下降,高替代组的ACP、MDA水平显著上升（P＜0.05）。随饲料CAP替代水平的增加,高替代组中出现了炎症肝细胞和球状肿大肝细胞;ACP、MDA含量增高,还原型谷胱甘肽水平显著降低（P＜0.05）。随饲料CAP替代水平的增加,羟甲基戊二酰辅酶A还原酶（hmgcr）相对表达量显著上调,CAP60组fxr相对表达量显著高于对照组,Kelch样ECH关联蛋白1（keap1）表达水平显著低于对照组（P＜0.05）。随饲料CAP替代水平的增加,后肠胰蛋白酶活性显著降低,抗菌肽（epinecidin）表达显著上调（P＜0.05）。综上所述,用乙醇梭菌蛋白替代珍珠龙胆石斑鱼饲料中45%以下的鱼粉不会显著降低生长摄食,而替代量高于45%会对机体和肝脏造成一定的氧化损伤,对肝脏及肠道健康产生一定的负面影响,并显著降低生长性能,但会提高肝脏的胆固醇合成、代谢能力和肠道产生抗菌肽的能力。在不显著负面影响生长和健康产生的前提下,推荐乙醇梭菌替代珍珠龙胆石斑鱼饲料鱼粉的水平在45%以内。综上所述,在本实验条件下,黑水虻幼虫粉在珍珠龙胆石斑鱼配合饲料中的对鱼粉的替代水平不宜超过10%,小球藻粉则不宜超过15%;而乙醇梭菌蛋白则可以替代珍珠龙胆石斑鱼饲料中45%以下的鱼粉,效果较好。