为了探索乳酸杆菌在胃肠道中的分布情况及与宿主免疫系统的相互作用，本研究选用六株从鸡胃肠道分离的乳酸杆菌作为绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)的表达载体。这六株乳酸杆菌分别是果糖乳杆菌C2、德氏乳杆菌德氏亚种C12、肠乳杆菌D2、嗜淀粉乳杆菌D14、德氏乳杆菌乳亚种D17和嗜酸乳杆菌K9。本研究首先构建含有绿色荧光蛋白基因(green fluorescent protein gene，gfp)的重组质粒，然后将其电转化乳酸杆菌。成功获得表达GFP的果糖乳杆菌C2(C2-GFP)和德氏乳杆菌乳亚种D17(D17-GFP)，C2-GFP和D17-GFP在无抗生素压力选择情况下，连续培养10代，GFP在D17和C2中均获得稳定表达。最后将上述重组D17-GFP口服接种鸡，观察其在消化道中的分布。整个试验分为两部分： 第一部分：构建含有绿色荧光蛋白基因的质粒，电转化鸡胃肠宿主乳酸杆菌。根据质粒pRV85的基因序列设计了一对引物P1、P2，以pRV85为模板，PCR(polymerase chain reaction)扩增得到包含启动子的绿色荧光蛋白基因pldhL-gfp片断。该片断分别经Apa Ⅰ和Cla Ⅰ酶切后，克隆到大肠杆菌和乳酸杆菌的穿梭质粒pLEM415中，转化大肠杆菌DH5α，从DH5α中提取重组质粒pLEM415∷gfp，再将pLEM415∷gfp电转化乳酸杆菌。提取质粒进行PCR和酶切验证。结果表明gfP成功转入乳酸杆菌中，在不同的电击条件下，乳酸杆菌的转化效率有所不同。荧光显微镜下可观察到重组乳酸杆菌发出绿色荧光，且gfP在乳酸杆菌中得到了稳定的表达。该乳酸杆菌可用于活体观察细菌的分布和活动。 第二部分：给鸡口服重组乳酸杆菌D17-GFP，观察该乳酸杆菌在胃肠道中的分布。在获得稳定表达绿色荧光蛋白的德氏乳杆菌乳亚种D17(D17-GFP)菌株后，口服接种二十日龄的鸡，于接种后1.5、6、12、24、48和72h分别取胃肠内容物接种培养并计数，同时取胃、空肠、回肠和盲肠做冰冻切片，在荧光显微镜下观察D17-GFP的分布。结果表明德氏乳杆菌乳亚种D17工程菌在接种小鸡6h后，胃肠道的内容物中可发现D17-GFP，在42h时细菌数量达到最大，并且3d后胃肠道中仍存在一定数量(约10~4CFU／g)的乳酸杆菌。表明乳酸杆菌可较长时间的定植于肠黏膜表面。在荧光显微镜下可清晰的观察到D17-GFP主要存在于肠道的内容物中，少数细菌粘附在各肠段的粘膜上，个别细菌甚至可进入肠黏膜固有层中。