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第一部分柠檬苦素xylocarpin H在体外肠道菌群和肝微粒体中的代谢研究目的:基于对柠檬苦素xylocarpin H大鼠体内代谢规律以及体内代谢产物的分析,开发一种肠道菌群和肝微粒体模型为基础的柠檬苦素xylocarpin H的体外代谢的分析方法,阐明其体外代谢过程,揭示其体外代谢规律,为完善柠檬苦素xylocarpin H的代谢提供基础。方法:用肠道菌群和肝微粒体代谢模型进行柠檬苦素xylocarpin H体外代谢实验,分别收集不同时间点的模型组样品,最后将每个模型组的各个时间点样品进行混合,经过前处理操作,运用UHPLC-QTOF-MS/MS技术分析处理后的样品。色谱条件:Kinetex-C18色谱柱（100 mm×2.1 mm,2.6μm）,柱温为40℃,进样量为5μL。流动相的组成:水（A,含0.1%甲酸-1 m M乙酸铵）和乙腈（B）,流速为400μL/min。梯度洗脱程序:0～2 min,5%B;2～8 min,5–30%B;8～35 min,30–45%B;35～45 min,45–95%B。质谱条件:Duo Spray离子源正/负离子模式,帘气（CUR）,35 psi;雾化气（GS1）,55 psi;加热气（GS2）,55 psi;温度（TEM）,550oC;源喷射电压（Ion Spray Voltage Floating）,5.5/-4.5 k V;信息依赖采集（IDA）模式:TOF-MS全扫描模式采集范围为100-1000 Da,解簇电压（DP）为80/-80 V,碰撞能量（CE）为5/-5 e V,累积时间0.2 s;TOF-MS/MS扫描模式采集范围为50-1000 Da,解簇电压（DP）为80/-80 V,碰撞能量（CE）为35/-35 e V,扩展能量电压CES为15 e V,累积时间0.1 s;采用MMDF和DBS。通过比较空白对照组和实验组的质谱数据,结合母药柠檬苦素xylocarpin H质谱裂解规律及大鼠体内代谢规律鉴定柠檬苦素xylocarpin H体外代谢产物结构,阐明柠檬苦素xylocarpin H的体外代谢途径。结果:共鉴定出了26个柠檬苦素xylocarpin H的体外代谢产物（Ⅰ相代谢产物22个,Ⅱ相代谢产物4个）,其中人肝微粒体中9个,大鼠肝微粒体中10个,大鼠肠道菌群中21个。实验结果显示,柠檬苦素xylocarpin H体外代谢的Ⅰ相代谢转化途径为水解反应、氧化反应和还原反应,而Ⅱ相代谢转化途径为甲基化反应、硫酸酯化反应,葡糖醛酸化反应,以及磷酸酯化的结合反应。其中大鼠肠道菌群中检测到代谢物最多,其次是人肝微粒体和大鼠肝微粒体。结论:本研究应用UHPLC-QTOF-MS/MS技术,鉴定了柠檬苦素xyl ocarpin H体外代谢产物,完善了柠檬苦素xylocarpin H的代谢规律,为为柠檬苦素xylocarpin H的进一步药理学研究和进一步开发提供了实验依据。第二部分柠檬苦素xylocarpin H对代谢酶活性影响研究目的:基于之前对柠檬苦素xylocarpin H的体外血浆稳定性实验,发现柠檬苦素xylocarpin H可能是一种强的酯酶抑制剂,开发并建立测定柠檬苦素化合物对代谢酶活性的方法,其中包括人羧酸酯酶,胆碱酯酶,人芳基乙酰胺脱乙酰酶和细胞色素P450（CYP450）酶等,为柠檬苦素化合物开发为酯酶抑制剂药物和合理用药提供实验依据。方法:以人肝微粒体为实验模型,分别建立了液质联用方法,荧光检测方法和紫外检测方法对柠檬苦素化合物进行了人羧酸酯酶,胆碱酯酶,AADAC和CPY450酶的活性筛选。其中应用的液质方法是通过了中国药典2020版与美国食品和药物管理局（FDA）的方法学验证,包括选择性、灵敏度、线性、准确度、精密度、回收率、基质效应和稳定性。根据文献报道不同酯酶的用量、底物浓度、孵育温度、p H以及孵育时间等条件,最终确定了不同代谢酶孵育反应的最佳条件。柠檬苦素化合物对不同代谢酶的活性通过计算其对不同代谢酶的半抑制浓度(IC50)来评价。结果:应用建立的方法对柠檬苦素化合物进行了代谢酶活性的研究。其中柠檬苦素xylocarpin H和xyloccensin K对人羧酸酯酶1（HCES1）,乙酰胆碱酯酶（Ach E）和丁酰胆碱酯酶（Buch E）的抑制作用很弱,IC50均＞100μM。而柠檬苦素xylocarpin H和xyloccensin K对人羧酸酯酶2（HCES2）抑制作用较阳性对照药(洛哌丁胺的IC50=3.77±0.30μM)相近,其中柠檬苦素xylocarpin H的IC50=19.13±4.48μM,xyloccensin K的IC50=27.94±0.31μM,对柠檬苦素xylocarpin H进行了进一步的抑制动力学研究,结果表明其对HCES2为反竞争性抑制,分子对接结果与实验结果一致。柠檬苦素xylocarpin H和xyloccensin K对人芳基乙酰胺脱乙酰酶（AADAC）抑制作用较阳性对照药(（-）表没食子儿茶素没食子酸酯IC50=1.61±0.85μM)相近,其中柠檬苦素xylocarpin H的IC50=2.05±1.42μM,xyloccensin K的IC50=24.05±0.005μM,对柠檬苦素xylocarpin H进行了进一步的抑制动力学研究,结果表明其对AADAC为非竞争性抑制,分子对接结果与实验结果一致。对柠檬苦素化合物进行了CYP450酶活性研究,发现柠檬苦素化合物对CYP1A2、CYP3A4、CYP2C9酶有显著抑制活性,且对CYP2A6有显著诱导活性。之后对其进行了分子对接模拟实验,分子对接结果与实验结果一致,验证了实验的准确性。结论:本研究对柠檬苦素化合物进行了酯酶活性研究,结果表明柠檬苦素xylocarpin H对AADAC酶有最显著的抑制活性,且为非竞争性抑制。这为柠檬苦素xylocarpin H开发为特异性AADAC抑制剂提供了更多有利的基础条件和价值。对柠檬苦素化合物进行了CYP450酶活性的筛选,发现柠檬苦素化合物对CYP450酶有较强的抑制和诱导活性,这提示当柠檬苦素化合物与其他药物联合时,容易产生因药物-药物相互作用而产生的不良反应。这为柠檬苦素化合物的临床安全有效用药提供科学依据和实验资料。