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弓形虫病是引发绵羊流产的主要原因之一,其主要感染途径是采食被弓形虫卵囊污染的水、饲草的水平传播和妊娠期母羊的先天性垂直传播。本研究于2017年至2019年共收集了166只绵羊心脏。分离出11个活弓形虫虫株(TgSheepCHn3~TgSheepCHn13),均从MAT滴度≥1∶100的绵羊心脏获得。在1∶100的抗体临界值下,25.3%(42/166)的羊心血液中发现弓形虫IgG抗体。对67个MAT效价为1∶25的心脏组织进行胃蛋白酶消化,7.5%(5/67)的心肌消化液检测到弓形虫核酸。11个弓形虫分离株对小鼠均可形成大脑包囊,呈非致死性。PCR-RFLP结果显示,7个分离株属于ToxoDB#2,4个分离株属于ToxoDB#4。
2019年采集7只母羊的血液及其流产胎儿11只,血液采用MAT方法检测弓形虫抗体,PCR检查胎儿各个脏器,石蜡切片进行病理组织学检查。结果发现:母羊和胎儿的血液弓形虫抗体都为阴性,72.73%(8/11)胎儿的组织中检测到弓形虫SAG1,病理组织显示11只流产胎儿都为活胎,各个脏器都有不同程度出血、淤血和水肿。结果表明,母羊在妊娠后期严重感染弓形虫,弓形虫可通过脐带和胎盘传播给胎儿。
为研究弓形虫感染对雄性动物生殖系统的影响,雄性BALB/c小鼠腹腔注射104个绵羊源弓形虫TgSheepCHn1(Chinese1)速殖子,分别采集弓形虫感染后2d,4d,6d,8d,10d(days post infection,DPI)和6周的小鼠生殖器官和副性腺,血清检测睾酮含量,采用H&E和IHC染色方法分析生殖系统的病理损伤情况和弓形虫的分布。结果发现,与对照组比较,雄性BALB/c小鼠感染弓形虫后睾酮含量先增加,8DPI后减少。6DPI后,小鼠生殖器官出现病理损伤,特点为副性腺>生殖器官。6DPI后,在各器官均可观察到弓形虫,多分布在被膜疏松结缔组织和间质,且随感染时间延长,弓形虫数量显著增加(P<0.05)。结果表明,小鼠感染弓形虫,对睾酮含量影响不明显,但虫体可侵入雄性生殖系统和副性腺,并引起损伤,推测弓形虫急性感染可减弱雄性动物生育功能,并可能通过精液传播。
为探究弓形虫是否经乳汁和胎盘感染胎儿,以弓形虫慢性感染的雌性BALB/c小鼠建立研究模型,建立乳汁和胎盘传播试验。试验A:采用MAT检测1-6月龄幼鼠血清中弓形虫抗体,1月龄幼鼠弓形虫抗体阳性率高达97.83%(45/46),感染弓形虫幼鼠和未感染幼鼠两月龄时的抗体转化有显著差异(P<0.001),3月龄时,未感染幼鼠的母源抗体完全消失,感染幼鼠的抗体增加或保持不变。A试验亲代哺乳喂养的幼鼠弓形虫垂直传播率为19.57%(9/46)。在试验A中,感染Me49虫株的小鼠和未感染小鼠携带母源抗体比与其他两组(TgCatCHn4,TgMonkeyCHn1)相比抗体滴度更高。试验B通过PCR和小鼠生物学鉴定测定弓形虫经胎盘的传播比率,为16.35%(17/104),推测母乳传播率为3.22%。本试验共繁育150只小鼠,弓形虫垂直传播率为17.33%(26/150)。
2019年采集7只母羊的血液及其流产胎儿11只,血液采用MAT方法检测弓形虫抗体,PCR检查胎儿各个脏器,石蜡切片进行病理组织学检查。结果发现:母羊和胎儿的血液弓形虫抗体都为阴性,72.73%(8/11)胎儿的组织中检测到弓形虫SAG1,病理组织显示11只流产胎儿都为活胎,各个脏器都有不同程度出血、淤血和水肿。结果表明,母羊在妊娠后期严重感染弓形虫,弓形虫可通过脐带和胎盘传播给胎儿。
为研究弓形虫感染对雄性动物生殖系统的影响,雄性BALB/c小鼠腹腔注射104个绵羊源弓形虫TgSheepCHn1(Chinese1)速殖子,分别采集弓形虫感染后2d,4d,6d,8d,10d(days post infection,DPI)和6周的小鼠生殖器官和副性腺,血清检测睾酮含量,采用H&E和IHC染色方法分析生殖系统的病理损伤情况和弓形虫的分布。结果发现,与对照组比较,雄性BALB/c小鼠感染弓形虫后睾酮含量先增加,8DPI后减少。6DPI后,小鼠生殖器官出现病理损伤,特点为副性腺>生殖器官。6DPI后,在各器官均可观察到弓形虫,多分布在被膜疏松结缔组织和间质,且随感染时间延长,弓形虫数量显著增加(P<0.05)。结果表明,小鼠感染弓形虫,对睾酮含量影响不明显,但虫体可侵入雄性生殖系统和副性腺,并引起损伤,推测弓形虫急性感染可减弱雄性动物生育功能,并可能通过精液传播。
为探究弓形虫是否经乳汁和胎盘感染胎儿,以弓形虫慢性感染的雌性BALB/c小鼠建立研究模型,建立乳汁和胎盘传播试验。试验A:采用MAT检测1-6月龄幼鼠血清中弓形虫抗体,1月龄幼鼠弓形虫抗体阳性率高达97.83%(45/46),感染弓形虫幼鼠和未感染幼鼠两月龄时的抗体转化有显著差异(P<0.001),3月龄时,未感染幼鼠的母源抗体完全消失,感染幼鼠的抗体增加或保持不变。A试验亲代哺乳喂养的幼鼠弓形虫垂直传播率为19.57%(9/46)。在试验A中,感染Me49虫株的小鼠和未感染小鼠携带母源抗体比与其他两组(TgCatCHn4,TgMonkeyCHn1)相比抗体滴度更高。试验B通过PCR和小鼠生物学鉴定测定弓形虫经胎盘的传播比率,为16.35%(17/104),推测母乳传播率为3.22%。本试验共繁育150只小鼠,弓形虫垂直传播率为17.33%(26/150)。