【摘 要】
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第一部分GPC1在肝癌组织样本中的临床研究目的:通过检测肝癌及其癌旁组织中磷脂酰肌醇蛋白聚糖-1（Glypican-1,GPC1）表达情况,分析GPC1表达差异与肝癌患者临床病理特征及生存预后的相关性,探讨GPC1异常表达对于肝癌患者的意义。方法:通过UALCAN网站中TCGA数据库在线分析肝癌及其癌旁组织中GPC1表达情况,及其表达情况与肝癌患者生存预后的关系。收集4例新鲜肝癌及癌旁标本,Wes
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第一部分GPC1在肝癌组织样本中的临床研究目的:通过检测肝癌及其癌旁组织中磷脂酰肌醇蛋白聚糖-1（Glypican-1,GPC1）表达情况,分析GPC1表达差异与肝癌患者临床病理特征及生存预后的相关性,探讨GPC1异常表达对于肝癌患者的意义。方法:通过UALCAN网站中TCGA数据库在线分析肝癌及其癌旁组织中GPC1表达情况,及其表达情况与肝癌患者生存预后的关系。收集4例新鲜肝癌及癌旁标本,Western Blot检测肝癌及癌旁标本GPC1表达。收集111对肝癌及配对的癌旁组织样本,利用免疫组化染色检测GPC1在样本组织中的表达差异。根据GPC1的表达高低分为两组,用统计学分析GPC1表达差异与肝癌患者临床病理特征及生存预后的相关性。结果:Western Blot结果提示4对肝癌中GPC1表达水平要高于其配对癌旁组织中表达水平（P＜0.05）。111对肝癌和癌旁组织样本GPC1的免疫组化结果提示,GPC1在肝癌中表达要高于配对癌旁组织（P＜0.05）。统计分析发现GPC1表达高低与患者术后总生存期和无瘤生存期成反比（P＜0.05）。结论:肝癌中GPC1表达水平高于癌旁,GPC1表达高低与患者预后呈反比,提示GPC1可能参与了肝癌的进展。第二部分GPC1在肝癌细胞增殖中的作用及机制研究目的:通过基因沉默技术,探讨GPC1在肝癌细胞中的生物学功能及作用机制。方法:构建携带GPC1干扰序列的慢病毒。采用慢病毒转染,构建GPC1低表达的肝癌细胞株Hep G2、Huh7、HCC-LM3,q-PCR验证GPC1的沉默效率,平板克隆、CCK-8和EDU染色检测Hep G2、Huh7、HCC-LM3细胞增殖能力的变化情况,细胞划痕检测Huh7和HCC-LM3细胞迁移能力的变化情况,Transwell检测Huh7和HCC-LM3细胞侵袭能力的的变化情况。通过裸鼠皮下成瘤在体内验证GPC1对Hep G2和HCC-LM3细胞增殖的影响。流式细胞术检测GPC1对Hep G2和HCC-LM3细胞周期的影响,Western blot检测GPC1对细胞周期相关蛋白的影响以及对PI3K/AKT相关通路调控蛋白的影响。结果:沉默Hep G2、Huh7和HCC-LM3中GPC1表达后,平板克隆、CCK-8和Edu染色实验提示:Hep G2和HCC-LM3细胞的增殖能力降低（P＜0.05）,而Huh7的增殖能力部分降低;细胞划痕实验提示:Huh7和HCC-LM3细胞的迁移能力明显减弱（P＜0.001）;Transwell侵袭实验提示:Huh7和HCC-LM3细胞的侵袭能力明显减弱（P＜0.001）。裸鼠皮下成瘤结果提示:沉默Hep G2和HCC-LM3中GPC1表达后,肝癌细胞在体内的增殖能力均明显降低（P＜0.05）。将裸鼠瘤体通过Ki-67染色提示,GPC1表达沉默组细胞Ki-67表达水平明显低于对照组。GPC1低表达使G2/M期停滞的细胞亚群显著增加（P＜0.05）,使促进细胞周期蛋白cyclin D1、cyclin B1和CDK1下调,使抑制细胞周期蛋白p21和p27上调（P＜0.05）。PI3K/AKT相关通路调控的蛋白p-Akt、p-Bad、p-GSK-3β、β-catenin、c-Myc下调以及Bax、p-PTEN、PTEN上调（P＜0.05）。结论:沉默GPC1表达后,肝癌细胞在体内外的增殖均受到了抑制。GPC1可能通过调节细胞周期及PTEN/Akt/β-catenin信号通路促进肝癌细胞增殖。GPC1有望成为肝癌精准治疗的潜在靶点。
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