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子痫前期（pre-eclampsia,PE）是一种妊娠期严重并发症。定义为妊娠20周后新发高血压,并且伴随或不伴随蛋白尿。PE是导致妊娠期母儿发病率和死亡率升高的主要原因之一,全球每年发病率为5%-8%。这种妊娠期全身综合征,严重时累及全身多个系统,包括神经系统、循环系统、呼吸系统、消化系统、泌尿系统和血液系统。临床上主要以高血压和蛋白尿为主要表现,严重时可发生心脑血管意外、肺水肿、肝肾功能障碍、Hellp综合征、凝血功能障碍、DIC等。重度PE患者临床症状重,极易发生产前或产后的心脑血管意外、胎盘早剥、产后出血、子痫或胎死宫内等。然而,目前临床上对于PE的治疗手段十分有限,控制血压,及时终止妊娠时仅有的有效手段。这些手段可能导致母儿的多种不良结局,包括早产,新生儿湿肺、新生儿多器官发育不良甚至死亡。治疗费用高,预后差,导致严重的家庭和社会负担。了解PE的发病机制,探索有效的临床治疗方法,制定防治策略,是产科面临的巨大挑战,刻不容缓。目前为止,PE的确切发病机制尚不清楚。学界认为PE的发病是多因素、多机制同时或交错发生的。而胎盘滋养细胞功能障碍,螺旋动脉重塑缺陷是PE发生的主要病理基础。了解PE和正常对照组胎盘中的差异表达分子,探究其与PE的临床发病相关性,有助于我们寻找PE的早期诊断方法和治疗策略。环状RNA近年来非编码RNA领域的研究热点,稳定性高、保守性好是这类非编码RNA的主要特点,适用于充当疾病的诊断标志和治疗靶点。根据前期胎盘环状RNA微阵列数据,筛选出circ DLG1。circ DLG1在PE中表达水平显著降低,并且定位于母胎界面基底板中。体外实验干预circ DLG1的表达,滋养细胞的侵袭迁移和上皮间质化水平有明显改变。提示circ DLG1与PE的发病之间存在重要联系。根据竞争性内源性RNA机制,我们提出circ DLG1/miR-421/m TOR假说,通过系列实验证明circ DLG1通过影响滋养细胞生物学行为,参与PE发病的其中一条发病机制,希望能为探索PE的临床诊断依据和防治策略提供新思路。目的:通过环状RNA微阵列分析,筛选出PE患者胎盘和正常妊娠妇女胎盘中差异表达的环状RNA-hsa＿circ＿0068697（circ DLG1）;鉴定并且明确circ DLG1的环状结构;明确circ DLG1在胎盘中的表达定位和在滋养细胞中的亚细胞定位;收集临床标本,分析circ DLG1与PE发病的临床相关性;体外实验探究circ DLG1对滋养细胞迁移和侵袭能力、上皮间质化的影响;生物信息学预测circ DLG1影响滋养细胞生物学行为的机制;探究circ DLG1影响滋养细胞迁移和侵袭能力、上皮间质化的作用机制。研究方法:本研究选取进行剖宫产的PE重度产妇胎盘组织（同时设置对照组）。进行微阵列分析;PCR、q RT-PCR、Sanger-aeq明确circ DLG1的环状结构;原位杂交明确在胎盘中的表达定位,和在滋养细胞中的亚细胞定位;q RT-PCR明确circ DLG1在PE患者胎盘中表达水平;收集临床资料,单因素和多因素回归分析明确circ DLG1和PE发病的临床相关性;HTR-8/Svneo人滋养细胞培养;过表达质粒和短发夹RNA转染HTR-8/Svneo细胞;Western blotting明确上皮间质化相关蛋白表达水平;transwell小室和划痕实验明确circ DLG1对于滋养细胞迁移和侵袭能力的影响;生物信息学分析circ DLG1的下游因子,并且绘制网络图;生物信息学分析、双荧光素酶报告基因、RNA pull down实验探究环状RNA与下游靶向微小（miR-421）结合关系、微小RNA与m RNA结合关系;使用质粒转染/共转染HTR-8/Svneo细胞;q RT-PCR细胞检测相关基因表达;Western blotting检测上皮间质化相关指标表达水平;transwell小室和划痕实验明确对滋养细胞迁移和侵袭能力的影响;SPSS、Graphpad Prism用于数据分析。结果:根据微阵列数据,以FC比值大于2和p小于0.01为筛选标准,筛选circ DLG1;circ DLG1是一种由DLG1第15-20外显子反向剪接后形成的一种环状RNA;circ DLG1在PE患者胎盘中表达水平显著降低,低于对照组;circ DLG1与PE发病相关;circ DLG1表达于滋养细胞细胞质中;在滋养细胞中,过表达circ DLG1,HTR-8/Svneo细胞侵袭、迁移和上皮间质化显著增强;抑制circ DLG1,HTR-8/Svneo细胞侵袭、迁移和上皮间质化显著减弱;根据“ce RNA”理论,使用生物信息学预测circ DLG1的下游微小RNA和m RNA;circ DLG1存在miR-421结合位点,过表达circ DLG1,miR-421表达水平显著降低;抑制circ DLG1,miR-421表达水平显著升高;过表达miR-421,HTR-8/Svneo细胞的迁移和侵袭能力、上皮间质化显著减弱;与sh-circ DLG1组相比,共转染sh-circ DLG1和miR-421inhibitor后,HTR-8/Svneo细胞的迁移、侵袭和上皮间质化被拯救;与shcirc DLG1组相比,共转染sh-circ DLG1和m TOR后,HTR-8/Svneo细胞的迁移、侵袭和上皮间质化被拯救;抑制circ DLG1后,m TOR磷酸化水平显著降低,共转染sh-circ DLG1和miR-421 inhibitor或sh-circ DLG1和m TOR后,这种效应被部分拯救。结论:circDLG1在PE胎盘中表达水平显著降低,可能与PE的发病存在直接关系。circ DLG1作为一种竞争性内源性RNA,能够通过结合miR-421,调控m TOR的表达,进而促进滋养细胞的迁移、侵袭和上皮间质化进程。