【摘 要】
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目的:牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.g.）是一种主要的牙周致病菌,能够激活多种免疫细胞诱发宿主的炎症反应。其中活化的巨噬细胞在吞噬、清除病原体的同时,也释放细胞因子,进一步扩大炎症反应。组织蛋白酶S（cathepsin S,Cat S）广泛存在于抗原提呈细胞（antigen-presenting cells,APCs）的溶酶体中,在水解蛋白的同时能够介导免疫
【基金项目】
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国家自然科学基金（No.81500858、81700977）；
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目的:牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.g.）是一种主要的牙周致病菌,能够激活多种免疫细胞诱发宿主的炎症反应。其中活化的巨噬细胞在吞噬、清除病原体的同时,也释放细胞因子,进一步扩大炎症反应。组织蛋白酶S（cathepsin S,Cat S）广泛存在于抗原提呈细胞（antigen-presenting cells,APCs）的溶酶体中,在水解蛋白的同时能够介导免疫反应。前期研究表明Cat S在牙周炎中促进树突状细胞（dendritic cell,DC）白细胞介素（interleukin,IL）-6的表达和诱导CD4+T细胞向Th17分化的作用。然而,Cat S在牙周炎中促进巨噬细胞分泌IL-6的具体相关机制尚未见报道。本研究通过揭示在P.g.脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）作用下Cat S诱发巨噬细胞IL-6高表达的具体作用机制,为临床上牙周炎的预防及靶向治疗提供新思路及理论依据。研究方法:（1）.分别提取牙周炎患者炎症牙龈组织以及种植牙手术患者术区健康牙龈组织蛋白,采用Western blot方法检测Cat S的表达水平;并将上述组织制作冰冻切片,对CD11b、CD11c、Cat S及PU.1进行免疫荧光染色。（2）.使用Western blot检测P.g.LPS（1μg/m L）处理的小鼠RAW264.7细胞中Cat S与IL-6的蛋白表达水平。（3）.使用Western blot检测P.g.LPS（1μg/m L）处理的Cat S sh RNA沉默与PU.1 sh RNA沉默的RAW264.7细胞中磷酸化-p38、磷酸化-NF-κB和IL-6的表达水平,采用酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测IL-6的分泌水平,通过RT-q PCR检测PU.1与Cat S的m RNA水平。结果:（1）.牙周炎患者的炎症牙龈组织中成熟Cat S表达水平明显高于对照组,炎症牙龈组织中巨噬细胞与树突状细胞高表达Cat S,同时巨噬细胞高表达PU.1,并且与Cat S共定位。（2）.P.g.LPS促进RAW264.7细胞中成熟Cat S与IL-6的表达。（3）.P.g.LPS促进RAW264.7细胞中磷酸化-p38、磷酸化-NF-κB与PU.1的蛋白表达以及IL-6的分泌;沉默PU.1明显降低Cat S的m RNA水平,而且沉默PU.1与沉默Cat S均显著抑制经P.g.LPS作用后p38、NF-κB的磷酸化以及IL-6的表达水平。结论:在炎症牙周组织中,PU.1调控巨噬细胞中Cat S的产生,并且Cat S通过诱导p38MAPK与NF-κB的活化,促进巨噬细胞高表达并分泌IL-6。
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