传统中药姜黄与甘草分别在2014年与2012年加入我国“药食同源”名录中。在加味龙胆泻肝丸、舒肝丸等传统方剂中均有二者联合用药的例子,其药效被广泛证明。但在分子水平无论是实验还是临床对其相互作用的研究都十分少有。本实验将两种中药的主要活性物质姜黄素、甘草酸、甘草次酸与人血清白蛋白相互作用进行研究,并探究药物-HSA二元体系以及三元体系之间的区别,为中药用于临床中治疗研究提供理论依据。1.姜黄素与人血清白蛋白相互作用研究姜黄素使HSA的荧光产生猝灭是静态猝灭。通过计算吉布斯自由能ΔG是负数,姜黄素与HSA的反应都是自发产生的。由于ΔS和ΔH的数值都为负数,所以姜黄素与HSA形成的复合物过程中都是氢键和范德华作用力在起作用,二者结合部位在Site I处。分子对接结果发现:姜黄素的氧原子和氢原子可以分别与Leu-182的氢原子和Asp-108的氧原子形成典型的氢键。同步荧光光谱结果显示HSA的荧光强度逐渐降低,并出现轻微的红移,这表明姜黄素能更好的实现与HSA有效的靠近,使结合更加容易。这表明姜黄素的存在导致HSA分子的空间构象发生了一定的变化。三维荧光光谱法和圆二色光谱法的分析也能证明这一结论。2.甘草酸、甘草次酸与人血清白蛋白相互作用研究实验对甘草次酸、甘草酸与人血清白蛋白的相互作用进行了研究。结果发现,甘草次酸对HSA的荧光产生猝灭的方式为静态猝灭,甘草酸为动态猝灭。氢键及疏水相互作用力在结合时发挥重要作用,二者结合部位在Site I处。分子对接模拟的结论也上述结论一致。在甘草次酸和HSA的结合过程中存在氢键,它们在甘草次酸的氧原子和Asp-13残基的氢原子之间。在甘草酸与HSA的结合中发现两个氢键,即甘草酸的氧原子和Leu-155残基的羟基的氢原子之间的氢键,以及羟基中的氢原子和Leu-22残基的氨基的氢原子。3.姜黄素-HSA-甘草活性物质三元体系相互作用探究本部分的实验能说明姜黄素-HSA与甘草次酸、甘草酸之间的相互作用,从而为改善姜黄素较差的生物利用度提供重要信息。将甘草次酸、甘草酸分别添加到HSA-姜黄素系统中进行观察,可知两个三元体系中的荧光猝灭类型都为静态猝灭。在姜黄素-HSA-甘草次酸、姜黄素-HSA-甘草酸体系中仅具有一种类型的HSA独立结合位点。实验结合过程都是自发的,并且氢键和疏水作用是主要作用力。姜黄素-HSA-甘草次酸和姜黄素-HSA-甘草酸系统中的键合距离r均小于7nm,满足条件0.5 R0＜r＜1.5 R0,这充分表明姜黄素-HSA-甘草次酸和姜黄素-HSA-甘草酸体系都发生了非辐射能量转移。姜黄素首先与HSA结合形成姜黄素-HSA复合体,然后甘草次酸或甘草酸对该复合体起作用。最重要的是,与不存在甘草次酸或甘草酸相比,结合距离缩短了。位点I上的甘草次酸或甘草酸结合使姜黄素更容易进入HSA的疏水口袋。由于存在甘草次酸和甘草酸,HSA的结构发生了变化,从而使姜黄素可以更轻松地与I位结合。在圆二色光谱实验中纯HSA的α-螺旋含量为49.92%,姜黄素-HSA-甘草次酸和姜黄素-HSA-甘草酸体系HSA的α-螺旋含量分别降低至40.25%和40.44%,并且甘草次酸的作用大于甘草酸的作用。同步荧光光谱、三维荧光光谱的数据也能证明体系中的HSA分子的空间构象发生了一定的变化。