【摘 要】
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目的:高尿酸血症（Hyperuricemia;HUA）与肾小管上皮细胞的损伤密切相关。线粒体自噬参与了多种肾脏疾病的发生发展,但目前其具体机制尚不十分清楚。抗增殖蛋白2（Prohibitin2;PHB2）是一种位于线粒体内膜上的蛋白,对维持线粒体形态与功能的稳定发挥着重要作用;最新研究表明PHB2蛋白是受损线粒体自噬过程中的线粒体内膜上的主要受体。本研究拟探究PHB2蛋白介导的线粒体自噬在高尿酸损
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目的:高尿酸血症（Hyperuricemia;HUA）与肾小管上皮细胞的损伤密切相关。线粒体自噬参与了多种肾脏疾病的发生发展,但目前其具体机制尚不十分清楚。抗增殖蛋白2（Prohibitin2;PHB2）是一种位于线粒体内膜上的蛋白,对维持线粒体形态与功能的稳定发挥着重要作用;最新研究表明PHB2蛋白是受损线粒体自噬过程中的线粒体内膜上的主要受体。本研究拟探究PHB2蛋白介导的线粒体自噬在高尿酸损伤人肾小管上皮细胞（Human kidney proximal tubular epithelial cell;HK-2）中的作用机制。为今后阐明高尿酸血症相关肾脏疾病的机制提供实验依据。方法:1.体外培养HK-2细胞,根据实验需求,将实验分为正常对照组、活性氧抑制剂N-乙酰基-L-半胱氨酸（N-acetyl-L-cysteine;NAC）组、尿酸（Uric acid;UA）组（8mg/d L UA、16mg/d L UA、24mg/d L UA）以及干预组（8mg/d L UA+NAC、16mg/d L UA+NAC、24mg/d L UA+NAC）;将各实验组细胞分别培养24h和48h,24h和48h后分别检测各实验组中不同药物或培养基对HK-2细胞增殖的抑制率。2.体外培养HK-2细胞,按实验需求设置正常对照组、NAC组、尿酸组（16mg/d L UA）、干预组（16mg/d L UA+NAC）,再将HK-2细胞分别培育24h;分别检测各组HK-2细胞内活性氧（Reactive oxygen specie;ROS）含量、线粒体膜电位（Mitochondrial membrane potential;MMP）以及线粒体内膜自噬相关蛋白PHB2的表达水平。结果:1.尿酸组较对照组显示UA对HK-2细胞的增殖有明显的抑制作用（P＜0.01）,且抑制率总体随着UA浓度的增加和刺激时间的延长而增高。干预组较尿酸组显示加入NAC预处理后UA对细胞的抑制率总体降低,特别是当UA浓度为16mg/d L时（P＜0.05）。2.尿酸组（16mg/d L UA）较对照组显示HK-2细胞ROS的含量明显升高,MMP明显降低,PHB2的表达水平明显升高（P＜0.05）;干预组（16mg/d L UA+NAC）较尿酸组（16mg/d L UA）显示细胞中ROS的含量明显的降低,MMP明显升高,PHB2的表达水平明显降低（P＜0.05）。结论:通过本次实验,我们发现了高尿酸通过诱导氧化损伤肾小管上皮细胞,并通过ROS/PHB2轴激活肾小管上皮细胞线粒体自噬。
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