【摘 要】
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Bt 9816C是一株野生Bacillus thuringiensis菌株,从中检测到的杀虫晶体蛋白基因有:cry1Aa,cry1Ac,cry1I, cry2,vip3A.9816C的孢晶复合物对棉铃虫和甜菜夜蛾具有很高的杀虫活
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Bt 9816C是一株野生Bacillus thuringiensis菌株,从中检测到的杀虫晶体蛋白基因有:cry1Aa,cry1Ac,cry1I, cry2,vip3A.9816C的孢晶复合物对棉铃虫和甜菜夜蛾具有很高的杀虫活力,其LC<,50>分别为305μL/L和501μL/L.9816C表达的Vip3A蛋白存在于发酵上清液中,9816C发酵上清液对棉铃虫和甜菜夜蛾具有较好的杀虫活力,其LC<,50>分别为:690ng/cm<2>和570ng/cm<2>.而除去Vip3A的9816C晶体蛋白也对棉铃虫和甜菜夜蛾具有很高的杀虫活力,其LC<,50>分别为136ng/cm<2>和337ng/cm<2>.Bt标准株HD-73仅含有cry1Ac基因,其晶体蛋白对棉铃虫具有毒力,LC<,50>为248ng/cm<2>;对甜菜夜蛾没有毒力.将克隆自9816C的cry1Ac基因转化无晶体Bt受体菌Bt9816C-NP,得到转化子T-2.T-2晶体蛋白对棉铃虫和甜菜夜蛾都没有毒力.T-2毒素与棉铃虫和甜菜夜蛾BBMV的配体印记图谱也不同于HD-73.这表明9816C的cry1Ac基因不同于标准株HD-73中的cry1Ac基因.棉铃虫和甜菜夜蛾幼虫中肠液的pH值为10.0左右,有利于Bt晶体蛋白的溶解.9816C、T-2和HD-73晶体蛋白在体外用胰蛋白酶处理和用昆虫(棉铃虫,甜菜夜蛾)中肠液处理的效果没有明显区别,表明它们的毒力差异并非由棉铃虫,甜菜夜蛾中肠液的差异造成.通过配体印迹法研究发现,9816C,T-2和HD-73都能与棉铃虫和甜菜夜蛾中肠BBMV结合.9816C和HD-73与棉铃虫BBMV的结合图谱完全相同,而与甜菜夜蛾BBMV的结合图谱有明显区别:9816C与甜菜夜蛾BBMV有十分清晰两条结合带,其分子量大小约为210kD左右.该特异性结合位点的存在正是9816C对甜菜夜蛾具有高毒力的原因.用表涂法和光散射分析法检测了晶体蛋白的杀虫效果.两种方法的测定结果有很好的一致性.光散射分析的方法可以作为常规生物测定方法的一个补充.
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