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畜禽血液中含在丰富的血红素铁,在饮料、酱油等食品中具有广泛应用价值。本研究以猪血红蛋白(Hb)为原料,在真空低压高频脉冲(LHPEF)条件下,结合胰蛋白酶降解而获得的一种具有生物活性的血红素肽-铁(Hemi Peptide-Fe).利用金属螯合亲合层析(MCAC)进行酶解液中Hemi Peptide-Fe分离纯化,并对Hemi Peptide-Fe分子结构、体外抗氧化性研究。为便于工业化生产应用,进行了Hemi Peptide-Fe的MBF絮凝回收及对Hemi Peptide-Fe在果蔬饮料中应用效果进行了研究。主要结果如下:通过自行研制的真空LHPEF酶解装置,在真空LHPEF条件下,结合胰蛋白酶有序可控降解猪Hb试验。结果表明,LHPEF参数:T1为-500.0us、T2为500.0us、△为1.000ms、f为50 kHz-200kHz、V1为1.88v、V2为-120mv、h为20.3,在37℃温度下,1.88v、200kHz的LHPEF处理猪Hb,电导率为3.45326×105μs/cm(对照组为0.645×104μs/cm)。紫外扫描曲线图中的真空LHPEF胰蛋白酶降物中有8个特征吸收峰,而对照组中为6个吸收峰,Native-PAGE蛋白质电泳图中有13个明显色带,而对照组中只有6个色带,高效凝胶色谱图中的特征吸收峰为43个,对照组中6个特征吸收峰。通过MCAC层析分离酶解产物中的Hemi Peptide-Fe试验。结果表明,经过二次MCAC层析,分离出的Hemi Peptide-Fe在Native-PAGE电泳图及高效凝胶色谱图中只有1条明显色带及1个特征吸收峰。分子质量为7529.0968Da,10%Hemi Peptide-Fe溶液中铁含量为1013.5μg/L,Hemi Peptide-Fe理论pI为8.10,蛋白脂质系数为92.73,GRAVY为-0.023,有6个高疏水性区域和3个高亲水性区域,无跨膜区,体外清除超氧阴离子抑制率为81.579%,清除·OH率为78.3%。为解决Hemi Peptide-Fe的MCAC分离纯化时间长,操作复杂等问题,开展了利用MBF絮凝回收Hemi Peptide-Fe的相关研究。通过红平红球菌(Rhodococcus erythropolis)在廉价发酵液中发酵产MBF,实现快速安全絮凝回收Hemi Peptide-Fe试验。结果发现,以发酵液为蔗糖30g/L,尿素7.5g/L,CaCl22g/L,MgS041g/L,NaCl 0.2g/L,pH 9,在37℃,转速150 rpm,发酵时间为72h,发酵产生的MBF对高岭土悬浊液絮凝率为89.85%。30L中试发酵参数为:发酵温度为35℃,搅拌转速为350rpm,初始pH7.90,终止pH7.73,发酵时间为96h。对MBF以及MBF与β-糊精、壳聚糖混合进行3因素3水平二次旋转正交试验(共23个处理组)絮凝回收Hemi Peptide-Fe试验。结果表明,将Hb酶解液pH调整到6.0,温度为45℃,超声波处理15min,絮凝回收Hemi Peptide-Fe达87.47%。以MBF 4%,β-糊精20%,壳聚糖1.591%作为复合絮凝剂,絮凝回收Hemi Peptide-Fe达88.47%。MBF絮凝回收Hemi Peptide-Fe属于拥挤沉淀。将以上研究获得的Hemi Peptide-Fe在果蔬饮料中应用及动物饲养试验。结果表明,Hemi Peptide-Fe在果蔬饮料中应用最佳配比为:Hemi Peptide-Fe 10mg/L,西红柿200ml/L,红枣汁200ml/L,甘草汁20ml/L,柠檬酸0.2g/L,蜂蜜15ml/L,黄原胶0.2g/L,CMCNa O.4g/L,海藻酸钠0.4g/L,胭脂红适量,维生素C 2.0g/L,用纯净水调节至1L。Hemi Peptide-Fe果蔬饮料在大鼠体内Hemi Peptide-Fe表观消化率达83.7%,LDso为7095 mg/kg·bw,95%置信区间为7968-6222mg/kg.bw。在7968 mg/kg.bw高剂量的Hemi Peptide-Fe果蔬饮料饲养雌、雄大鼠12周后,雌性大鼠血清中的血清谷丙转氨酶(ATL),谷草转氨酶(ATS),血清尿素氮(BUN),血清白蛋白(ALB)、血红蛋白(Hb)、红细胞、总蛋白(TP)指标分别为37.8±2.6U/L,154.6+9.4 U/L,5.75±0.3 mmol/L,34.8=3.0 g/L,154.2±4.8g/L,7.4±0.3×1012个/L和60.3±1.6 g/L,与生理盐水作为对照组的雌性大鼠血清中各对应指标分别为36.6=2.8U/L,152.3±8.6 U/L,5.85±0.4 mmol/L,35.5±2.5 g/L,145.6±6.5 g/L,7.3±0.6x 1012个/L和61.5±6.4 g/L;雄大鼠血清中各对应指标分别为36.4=4.0 U/L,154.6±9.6 U/L,.83+0.3mmo1/L,34.8±4.3 g/L,153.6±7.5 g/L,7.7±0.5×1012个/L和62.6±2.4 g/L,与生理盐水作为对照组的雄性大鼠血清中各对应指标分别为37.44=2.6 U/L,153.2±10.4 U/L,5.88±0.8 mmol/L,34.2±3.6 g/L,148.9±9.6 g/L,7.5±0.4×1012个/L和60.6±45 g/L。急性毒性试验和长期毒性中小鼠外观及解剖特征图与对照组相比无明显变化。