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众所周知,副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus,VP）以及单增李斯特菌（Listeria monocytogenes,LM）会轻易地附着于各种与食品相关的表面,借助于各种相互作用生长并且滋生出许许多多的细胞外多聚物（Extracellular Polymeric Substances,EPS）。其中,EPS包围细菌以生成的具有高度组织结构的3D膜状物质,就是所谓的生物被膜（Biofilm,BF）。VP的生物被膜和LM的生物被膜已日益成为海产品安全的重要威胁。细菌通过形成了生物被膜从而加强了自身的抗性,给食品加工和生产带来严重的负担。在食品领域里,为了保持食品的口感及将营养价值的损失降低到最小,通常会充入不同比例的气体来保证食品的品质。有文献研究表明,不同比例的改性气体均能有效影响食源性致病菌譬如VP以及LM的细菌存活量。因此,本文选定在三种不同比例的改性气体条件下（厌氧anaerobiosis 20%CO2:80%N2;微需氧micro-aerobiosis 20%O2:80%N2;需氧aerobiosis 60%O2:40%N2;）,探究改性气体对VP生物被膜和LM生物被膜产生的影响的程度及改性气体影响的初步机制。本研究对食源性致病菌引起的食品安全问题、食品工业的发展以及未来的防控措施均有非常重要的意义。本文主要是以4株混合的VP和4株混合的LM为探究的主体。一开始,探究不同比例的改性气体对VP的生物被膜和LM的生物被膜形成的影响;其次,探究不同比例的改性气体对VP的生物被膜和LM的生物被膜结构特性的影响;最后,应用RT-q PCR方法探究了不同比例的改性气体影响生物被膜、EPS和毒力等相关基因表达的情况。本篇文章探究的重要内容和重要的探究结论见下文:1.改性气体对VP的生物被膜和LM的生物被膜产生的影响VP和LM都是常见的食源性致病菌,形成生物被膜对VP和LM的生存及传播具有重要的意义。相比于微需氧条件（对照组）,本研究应用结晶紫染色法测定了在厌氧和需氧条件下的VP和LM形成的生物被膜总量的变化;用化学方法分析了在形成EPS后,其中组成的胞外DNA（e DNA）、胞外蛋白和胞外多糖含量的变化。结果发现,对于VP,相比于微需氧条件（对照组）,厌氧条件下的OD600nm增加了,需氧条件下的OD600nm减少了;然而,对于LM,相比于微需氧条件（对照组）,厌氧条件下的OD600nm减少了,需氧条件下的OD600nm逐渐增加。相比于微需氧条件（对照组）,改性气体的处理显著地影响了VP和LM的EPS各组成成分的变化。改性气体对VP的各组成成分影响程度分别为e DNA>胞外蛋白>胞外多糖;对LM的各组成成分影响程度分别为胞外蛋白>e DNA>胞外多糖。相关性分析的结果表明改性气体主要通过影响VP和LM的EPS中e DNA和胞外蛋白从而影响生物被膜的形成。2.改性气体对VP的生物被膜和LM的生物被膜结构特性的影响本篇文章通过扫描电子显微镜（SEM）直观地观察了生物被膜形态结构的变化;并用激光共聚焦扫描显微镜（CLSM）成像方法观察并结合结构分析软件ISA-2,建立了一种结构分析方法,验证改性气体对生物被膜结构及其结构参数的影响。扫描电子显微镜的成像结果表明:相比于微需氧条件（对照组）,厌氧条件下,VP呈现良好的生物被膜网状结构;当在需氧状态下时,可以观察到零星甚至更少生物被膜细胞散布在接触表面上;对于LM,相比于微需氧条件（对照组）,在厌氧和需氧条件下,其形成的生物被膜呈现出与VP相反的表现。CLSM的成像结果表明,对于VP,相比于微需氧条件（对照组）,厌氧条件下的结果为致密的且组织结构非常良好的生物被膜结构。需氧条件下的结果为稀疏的生物被膜结构,其结构熵和粗糙度增加,而生物量和平均厚度显著降低。对于LM,相比于微需氧条件（对照组）,厌氧条件下的结果为较稀疏和较松散的生物被膜结构,需氧条件下的结果为更致密和组织结构良好的生物被膜结构,其生物量和平均厚度增加,而结构熵和粗糙度显著降低。结合之前分析改性气体对VP和LM的EPS的组分的影响,改性气体主要通过影响VP的e DNA、LM的胞外蛋白,从而来影响它们生物被膜结构的形成。3.改性气体对VP的生物被膜和LM的生物被膜相关基因表达水平的影响本研究的第三部分通过RT-q PCR方法分析生物被膜、EPS、毒力的表达水平来进一步揭示改性气体影响生物被膜的初步机制。结果表明,相比于微需氧条件（对照组）,在需氧条件下,与VP的生物被膜形成相关的鞭毛、菌毛和QS等基因下调;相比于微需氧条件（对照组）,在厌氧条件下,与LM的生物被膜形成相关的鞭毛基因下调。当改性气体处理VP的生物被膜和LM的生物被膜后,EPS相关基因也有不同的变化,结果表明改性气体会通过影响VP和LM的EPS相关基因的表达从而影响EPS的产生。不同比例的改性气体处理生物被膜后,相比于微需氧条件（对照组）,VP的T3SS相关基因有调节作用,而且LM的毒力基因也有差异,结果表明不同比例的改性气体会通过影响毒力基因的表达情况从而会影响菌株的致病性。