【摘 要】
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目的运用RT-qPCR方法检测Linc00324在白血病和正常人外周血白细胞中的表达,并比较相对表达量的差异;根据患者的相关临床资料,分析Linc00324的表达水平与临床相关检测指标的相关性,以期明确Linc00324在白血病患者诊断、治疗、预后中的作用。方法1.采集白血病患者外周血白细胞49例,所有白细胞均取自临床表现,细胞形态学、免疫分型、染色体分型确诊的白血病患者。正常对照组为年龄、性别匹
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目的运用RT-qPCR方法检测Linc00324在白血病和正常人外周血白细胞中的表达,并比较相对表达量的差异;根据患者的相关临床资料,分析Linc00324的表达水平与临床相关检测指标的相关性,以期明确Linc00324在白血病患者诊断、治疗、预后中的作用。方法1.采集白血病患者外周血白细胞49例,所有白细胞均取自临床表现,细胞形态学、免疫分型、染色体分型确诊的白血病患者。正常对照组为年龄、性别匹配的健康供者20例。2.分离白细胞,并提取RNA,转录合成c DNA。3.根据Genebank中的Linc00324序列,设计其特异性引物,以SYBR GreenⅡ为染料,实时荧光定量PCR检测Linc00324的表达情况,相对表达量以ΔCT（目的基因CT值-内参基因CT值）表示。4.分析Linc00324与各临床指标的相关性,包括年龄,性别,白细胞计数,原始细胞比例,骨髓增生程度、基因检测、染色体核型、细胞免疫分型以及用药前后,危险度分层。5.采用软件SPSS 17.0分析数据。计量资料符合正态分布的使用均数±标准差（?X±SD）表示;两变量间相关分析,符合正态分布采用两变量pearson相关分析,不符合正态分布采用两变量spearman秩相关分析;相关率的构成比采用卡方分析或Fisher确切概率法。符合正态分布的计量资料采用t检验或方差分析计算统计量和P值。以P＜0.05为有统计学差异。目的基因和内参基因扩增效率中的回归方程为线性回归所得。结果1.RNA纯度和质量分析:所提取白细胞总RNA经微量核酸检测仪检测OD260/OD280在1.9～2.1之间。琼脂糖凝胶电泳表明,产物单一,且无明显降解;扩增后观察熔解曲线显示单一峰,说明扩增产物均一,无特异扩增或引物二聚体。2.与正常对照组相比,AML组Linc00324表达水平显著降低（P＜0.05）。正常对照与ALL、AML与ALL组间Linc00324的表达水平无显著性差异。3.与正常对照组相比,白血病完全缓解（CR）组、部分缓解（PR）组、复发组和未治疗组的Linc00324表达水平明显降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）。与未治疗组相比,CR组和复发组Linc00324表达水平明显升高（P＜0.05）。4.AML各亚型间的Linc00324的表达水平无显著性差异;但与正常对照组相比,M2、M3、M4、M5亚型的Linc00324表达水平明显降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）。5.Linc00324的表达与白血病细胞比例的相关性分析:Linc00324的表达水平与早幼粒细胞比例呈负相关（r=0.368,P=0.032）,差异有统计学意义（P＜0.05）;Linc00324的表达水平与原始粒细胞,原始红细胞、原单核细胞、原幼单等幼稚细胞比例无相关性。6.Linc00324的表达水平与WT1基因表达呈负相关（P=0.01）;与其他基因CEBPA、NPM1、FLT3/ITD、PML/RARa、BCR/ABL等无相关性。7.与正常组相比,高、中、低三个危险度中Linc00324的表达水平均明显减少。Linc00324的表达水平与AML患者危险度呈负相关（P=0.004）。且不同危险度之间Linc00324的表达水平有显著性差异。8.与正常组相比,正常核型的白血病患者、异常核型白血病患者Linc00324的表达水平明显降低。但染色体核型的变化不影响Linc00324的表达水平。9.Linc00324的表达水平与患者的年龄、性别、白细胞计数、骨髓增生程度、用药等因素均无相关性（P＞0.05）。结论1.AML患者外周血中Linc00324表达水平明显降低,其中以M2、M3、M4、M5亚型尤为明显。2.与正常对照组相比,白血病完全缓解组、部分缓解组、复发组和未治疗组的Linc00324表达水平明显降低。与未治疗组相比,CR组和复发组Linc00324表达水平明显升高。3.Linc00324的表达水平与早幼粒细胞比例呈负相关。4.Linc00324的表达水平与WT1基因表达呈负相关。5.Linc00324的表达水平与AML危险度呈负相关,且不同危险度之间Linc00324的表达水平有显著性差异。
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