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周围神经损伤会破坏轴突的连续性,引起神经末梢的变性,最终会导致多种神经元功能的部分或者完全丧失。随着分子细胞生物学的发展,越来越多的证据显示,神经生长因子NGF在周围神经再生、周围神经系统疾病的治疗起着重要的作用。
然而在实际应用中,由于体液的快速扩散作用,局部给药无法使NGF长时间保留在神经损伤部位,这造成了治疗的低效率。因此需要间隔性的多次给药,这种方式不但花费很高,而且由于过量的使用NGF,会引起炎症反应,带来副作用。因此,我们设想如果能够将NGF定向地锚定到神经受损部位,就有可能更好的促进周围神经损伤的修复。
为了验证这一设想,我们把两种重要的细胞外基质层粘连蛋白和胶原蛋白作为NGF的靶标。为使NGF能够特异结合到这两种基质,我们利用基因工程手段对NGF进行改造,把NGF分别与层粘连蛋白结合区和胶原结合区融合,得到的重组蛋白(分别为LBD-NGF和CBD-NGF)能分别与层粘连蛋白和胶原特异结合,并保留了NGF的生物学活性。在体外实验中,我们验证了与天然的NGF(NAT-NGF)相比,LBD-NGF和CBD-NGF在层粘连蛋白和胶原上可以保持高浓度和高活性。在体内,我们利用不同的动物模型,包括大鼠皮下包埋模型、兔耳缺血性溃疡模型以及大鼠坐骨神经钝挫伤模型分别验证了LBD-NGF和CBD-NGF的周围神经损伤修复效果。结果证明,与神经组织内源性的细胞外基质或者与生物支架材料特异结合的重组NGF能更持久地维持在周围神经受损部位,并以持续释放的方式起作用。这种方法避免了单独使用NGF的低靶标特异性,以及多次-高剂量的给药方式等缺点,从而显著提高周围神经损伤修复的效果。